SNT2520-2010贝类中A群轮状病毒检测方法普通PCR和实时荧光PCR方法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２５２０—２０１０贝类中犃群轮状病毒检测方法普通犘犆犚和实时荧光犘犆犚方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犵狉狅狌狆犃狉狅狋犪狏犻狉狌狊犻狀狊犺犲犾犾犳犻狊犺—犆狅狀狏犲狀狋犻狅狀犪犾犚犜犘犆犚犪狀犱狉犲犪犾狋犻犿犲犚犜犘犆犚犿犲狋犺狅犱２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局中华人民共和国出入境检验检疫行业标准贝类中犃群轮状病毒检测方法普通犘犆犚和实时荧光犘犆犚方法ＳＮ／Ｔ２５２０—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐ

2、ｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张１字数２３千字２０１０年５月第一版２０１０年５月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２０８４８定价１８．００元标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２５２０—２０１０前言本标准的附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局、国家认监委认证认可技术研究所、国家质量监督检验检疫总局标准法规中心、北京金纳信生物科技有限公司。本标准的主要起草人：

3、曾静、魏海燕、范爱红、饶红、江明、杨光、聂棱、张西萌、马旭。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２５２０—２０１０贝类中犃群轮状病毒检测方法普通犘犆犚和实时荧光犘犆犚方法１范围本标准规定了贝类样品中Ａ群轮状病毒的普通ＲＴＰＣＲ和实时荧光ＲＴＰＣＲ检测方法。本标准适用于贝类中Ａ群轮状病毒的检测；食物中毒样品中Ａ群轮状病毒的检测可参照使用。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

4、凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ１９４８９实验室生物安全通用要求ＧＢ／Ｔ２７４０３实验室质量控制规范食品分子生物学检测３术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。３．１术语和定义www.bzfxw.com３．１．１轮状病毒狉狅狋犪狏犻狉狌狊轮状病毒属于呼肠弧病毒科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、轮状病毒属。病毒颗粒呈球形，直径６０ｎｍ～８０ｎｍ，双层衣壳，无包膜，负染后在电镜下观察，病毒外形呈车轮状，故名轮状病毒。３．１．２犆狋值犮狔犮犾犲狋犺狉犲狊犺狅犾犱每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循

5、环数。３．１．３纳米磁珠犿犪犵狀犲狋犻犮狀犪狀狅狆犪狉狋犻犮犾犲狊利用纳米技术将磁性材料如Ｆｅ３Ｏ４制成纳米微粒，大小介于原子簇与一般微粒子之间（直径一般小于１００ｎｍ），ＭＮＰ的量子尺寸效应使之展现出许多特有的性质，如比表面积大、表面活性中心多、表面反应活性高、吸附能力强等，为生物和医学应用研究提供了更加科学的手段。３．２缩略语３．２．１犇犈犘犆犱犻犲狋犺狔犾狆狔狉狅犮犪狉犫狅狀犪狋犲焦碳酸乙二酯。３．２．２犕犖犘犿犪犵狀犲狋犻犮狀犪狀狅狆犪狉狋犻犮犾犲狊纳米磁珠。３．２．３犘犈犌狆狅犾狔犲狋犺狔犾犲狀犲犵犾狔犮狅犾聚乙二醇。１标准分享网www.bzfxw.com免费下载

6、犛犖／犜２５２０—２０１０３．２．４犚犖犪狊犲狉犻犫狅狀狌犮犾犲犪狊犲核糖核酸酶或ＲＮＡ酶。３．２．５犫狆犫犪狊犲狆犪犻狉碱基对。４方法原理贝类主要将病毒富集在消化腺中，取消化腺组织，加入匀浆缓冲液研磨，通过温育促进病毒粒子释放，利用ＰＥＧ８０００使病毒沉降，采用纳米磁珠直接从ＰＥＧ８０００沉降后的病毒悬液中富集病毒粒子，吸附于纳米磁珠上的病毒粒子经高温裂解，释放出病毒ＲＮＡ，无需进一步纯化，直接用普通ＲＴＰＣＲ和实时荧光ＲＴＰＣＲ方法进行检测。５试剂所有实验用试剂均为分析纯，所有试剂均用无ＲＮａｓｅ容器分装；除另有说明，实验用水均为去离子水，按ＧＢ／Ｔ６６８２的有关规

7、定。５．１匀浆缓冲液：磷酸氢二钠缓冲液（ｐＨ９．６），见附录Ａ．１．１。５．２Ａ群轮状病毒阳性对照样品：轮状病毒阳性样本，或者选用含轮状病毒目的基因的质粒作为普通ＲＴＰＣＲ和实时荧光ＲＴＰＣＲ的阳性对照，轮状病毒目的基因序列参见附录第Ｂ．１章和第Ｂ．２章。５．３ＰＥＧ８０００溶液www.bzfxw.com：见附录Ａ．１．２。５．４ＲＮＡ逆转录试剂盒：ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔⅢＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄＳｙｎｔｈｅｓｉｓＳｙｓｔｅｍｆｏｒＲＴＰＣＲ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ１）或其他等效产品。Ｃａｔ．Ｎｏ．１８０８０