SNT2178-2008危险品哺乳动物红细胞微核试验方法.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１７８—２００８危险品哺乳动物红细胞微核试验方法犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻狀狏犻狏狅犿犪犿犿犪犾犻犪狀犲狉狔狋犺狉狅犮狔狋犲犿犻犮狉狅狀狌犮犾犲狌狊犳狅狉犱犪狀犵犲狉狅狌狊犵狅狅犱狊２００８０９０４发布２００９０３１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜２１７８—２００８前言本标准修改采用联合国经济合作与发展组织（ＯＥＣＤ）化学品测试方法Ｎｏ．４７４《哺乳动物红细胞微核试验》（１９９７）。本标准与ＯＥＣＤ化学品测试方法Ｎｏ．４

2、７４相比，存在以下差异：———对ＯＥＣＤ化学品测试方法Ｎｏ．４７４进行了编辑性修改；———增加了前言部分；———增加了试剂和仪器内容。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所。本标准主要起草人：张园、赵好力宝、于智睿、赵琢、熊中强、李学洋。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜２１７８—２００８危险品哺乳动物红细胞微核试验方法１范围本标准规定了哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核

3、试验的术语和定义、试剂和仪器、试验方法及试验结果。本标准适用于检测危险化学品的致突变作用。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ１４９２４．１实验动物配合饲料通用质量标准ＧＢ１４９２５实验动物环境及设施卫生部《消毒技术规范》３术语和定义下列术语和定义适用于本标准。３．１微核犿犻犮狉狅狀狌犮犾犲狌狊在细胞的有丝分裂后期，染色体有规律地

4、进入子细胞形成细胞核时，仍然滞留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整条染色体。它在末期以后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内而形成，因比主核小，故称为微核。３．２微核率犿犻犮狉狅狀狌犮犾犲狌狊犮犲犾犾狊狉犪狋犲含有微核的嗜多染红细胞数，以千分率（‰）表示。３．３着丝粒犮犲狀狋狉狅犿犲狉犿；犽犻狀犲狋狅犮犺狅狉犲细胞分裂中期染色体上纺锤丝附着的区域，借此子代染色体得以有规律地向子代细胞两极移动。３．４正染红细胞狀狅狉犿狅犮犺狉狅犿犪狋犻犮犲狉狔狋犺狉狅犮狔狋犲；犖犆犈成熟红细胞，因其核糖体已消失，可通过选择性的染色

5、而与未成熟红细胞区别开来。３．５嗜多染红细胞狆狅犾狔犮犺狉狅犿犪狋犻犮犲狉狔狋犺狉狅犮狔狋犲；犘犆犈未成熟红细胞，是红细胞成熟过程中的一个中间阶段，此时因胞质内仍含有核糖体，可通过选择性的染色而与成熟红细胞区别开来。４试剂和仪器４．１试剂全部试剂除注明外，均为分析纯，试验用水为蒸馏水。４．１．１小牛血清（灭活）：配制方法见《消毒技术规范》。１版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜２１７８—２００８４．１．２姬姆萨（Ｇｉｅｍｓａ）染液、Ｇｉｅｍｓａ应用液：配制方法见《消毒技术规范》。４．１．３磷酸盐缓冲液（ｐＨ６．８）：配制方法见《消毒技术规范》。４．１．４甲醇

6、４．２仪器与器材生物显微镜、恒温水浴箱、解剖剪、镊子、止血钳、注射器、灌胃针头、载玻片、塑料吸瓶、乳钵、干净纱布、滤纸等。５试验方法５．１试验动物常规选用初成年的健康小鼠和大鼠。选用体重为２５ｇ～３０ｇ的小鼠或体重１５０ｇ～２００ｇ的大鼠５０只，雌雄各半。试验动物饲养条件应符合ＧＢ１４９２４．１和ＧＢ１４９２５有关规定。５．２剂量分组———至少设置三个剂量组，每个剂量组１０只动物，雌、雄性各半，同时应设阳性对照和阴性对照；———高剂量组应达到不产生动物死亡的最大毒作用剂量；———一般取受试样品１／５、１／１０、１／２０ＬＤ５０剂量，以求获得微核的剂量反应关系曲线

7、；———阳性对照物可选用环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、甲磺酸乙脂（ｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｎｅｓｕｐｈｏｎａｔｅ）、乙基亚硝基脲（ｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ）、丝裂霉素Ｃ（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎＣ）、三亚乙基密胺（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）等，如使用特殊溶剂的，应设溶剂对照。５．３限度试验如果单次染毒剂量不小于２０００ｍｇ／ｋｇ体重，未出现毒性效应，且根据资料预期受试物无遗传毒性，则不需要进行其他染毒剂量的试验。５．４样品处理通常用蒸馏水、生理盐水、植物油、食用淀粉、羧甲基纤维素钠等，溶剂应既不干扰测定物质也不产生毒性。如使用特殊溶剂

8、或载体，应