临床检验基础实验课复习

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基本仪器1、毛细吸管:10μl、20μl2、改良牛鲍(Neubauer)计数盘:1个计数池(3x3x0.1mm)=9个大方格中央1个大方格(1x1x0.1mm)=25个中方格=400个小方格=1μl四角1个大方格,平分为16个中方格3、采血管:紫色:EDTA-K2血常规检查黑色:3.2%枸橼酸钠与血比例1:4血沉检查血液检验一、血涂片染色1、血涂片:玻片不洁角度速度血滴推片边缘缺口推片边缘弧形空泡过大:厚过小:薄快:厚短慢:薄长堆积尾部不匀:厚薄相间过大:厚小:薄条样缺损中央薄两头厚尾尖2、瑞士染色瑞氏染料:伊红(碱)、亚甲蓝(酸)缓冲液:磷酸盐缓冲液(pH6.4-6.8)时间:染料(I液):5d左右,0.5-1minlocatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 缓冲剂(II液):等量或稍多,5-10min二、末梢采血1、消毒:75%酒精2、第一滴血因混有组织液,擦掉不用三、静脉采血1、消毒:30g/L碘酒,75%酒精2、有抗凝剂或其他添加剂的混匀四、血细胞计数WBC计数嗜酸粒计数RBC计数PLT计数稀释液2%冰乙酸丙酮-伊红Hayem液或枸橼酸钠甲醛盐水或生理盐水1%草酸铵稀释液作用稀释及破坏成熟RBC,固定WBC稀释,破坏RBC、其他WBC,使E着色稀释稀释,破坏RBC稀释液量0.38ml0.38ml2ml0.38ml血量20μl20μl10μl20μl稀释倍数202020020计数区域四角大方格上下两池四角及中央五个大方格中央大方格的五个中方格中央大方格的五个中方格沉淀时间2-3min3-5min2-3min10-15min公式N/4×10x20x106/LN×20x106/LN×5x10x200x106/LN×5x10x20x106/L参考值成人:(4-10)×109/L新生儿:(15-20)x109/L(0.05-0.5)×109/L成年男:(4.0-5.5)×109/L成年女:(3.5-5.0)(100-300)×109/LlocatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 儿童:(15-20)x109/L×109/L新生儿:(6.0-7.0)×109/L校正存在有核红时:100/(100+有核红)xN四、白细胞分类计数1、血涂片,瑞士染色2、体尾交界处,“弓”形检查3、比值中杆中叶嗜酸嗜碱淋巴单核比例%1-550-700.5-50-120-403-84、核左移:杆状核增多,出现幼稚中性粒核右移:5叶以上中性粒>3%五、MCV、MCH、MCHC1、测定项目:RBC计数、Hb测定、Hct测定2、Hb测定:血红蛋白仪法试剂预热配制参考值文齐液(HiCN转换液)水或文齐液预热30min20μlEDTA-K2血+5ml文齐液(混匀静置5min)成年男:120-160g/L成年女:110-150g/L新生儿:170-200g/L3、Hct测定:温氏法试剂器材读数参考值locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame EDTA-K2血水平离心机(2264g以上,离心30min),温氏管RBC柱层毫米数x0.01成年男:0.42-0.49成年女:0.37-0,48新生儿:0.47-0.67六、血沉魏氏测定方法locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 试剂器材时间读数参考值109mmol/L枸橼酸钠抗凝血魏氏血沉管,血沉架1hRBC下降暴露的血浆长度(mm)成年男:<15mm/h成年女:<20mm/h七、尿液常规检测1、外观:颜色(淡黄、深黄、淡红、红色、乳白、浓茶、咖啡)透明度(透明、微浑、浑浊)2、尿蛋白定性磺基水杨酸法加热乙酸法原理磺酸根阴离子与尿蛋白氨基酸阳离子结合生成不溶性蛋白盐沉淀,沉淀程度与尿蛋白量成正比加热煮沸使蛋白质变性,加入乙酸加速蛋白质沉淀试剂200g/L磺基水杨酸溶液5%乙酸溶液方法1ml尿液+2d试剂混匀,黑色背景下1min内观察(有空白对照)加热(黑观察)→5%乙酸2-4d→加热(黑观察)结果肉眼可见微浑±云雾状+颗粒++絮状+++大量絮状或凝块++++同左方法学评论灵明度高,应用于干化学法测尿蛋白,但若尿中存在高浓度尿酸(盐)、草酸盐等干扰因素或混入生殖系统分泌物时易造成假阳性结果。对白蛋白敏感而球蛋白不敏感。操作略复杂,同样受生殖道分泌物的干扰成假阳性。对白蛋白和球蛋白都敏感5、尿糖检测对象尿中的葡萄糖locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 原理高热、碱性环境中尿液中葡萄糖或其他还原性糖的醛基能将蓝色的硫酸铜还原为氧化亚铜,出现黄色至砖红色沉淀试剂班氏试剂(改良班氏定性试剂)方法尿离心取上清→2ml试剂煮沸1min观察试剂是否合格→加入0.2ml尿上清→混匀煮沸1-2min(尿液:班氏=1:10)结果蓝,色未变—蓝中绿无沉淀±液绿,黄绿沉淀少量+较多偏黄沉淀++液土黄,大量沉淀+++大量红沉淀++++方法学评价灵敏度较低,易受尿液中其他还原物质的影响而出现假阳性5、尿酮体环状法(Lange法)原理尿液中乙酰乙酸和丙酮与亚硝基铁氰化钠作用,与氨液接触后生成紫红色物质试剂亚硝基铁氰化钠、冰乙酸、25-28%浓氨水方法5ml尿+约250mg亚硝基铁氰化钠(混匀)+0.5ml冰乙酸(混匀)+2ml浓氨水(缓慢沿管壁注入)结果看液面交界处颜色变化:10min无紫环—10min内浅紫红环±10min渐出现紫环+较快出现紫环++立刻出现紫环+++或++++locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 5、尿胆红素(Harrison法)原理尿中胆红素被氯化钡吸附形成胆红素钡盐沉淀,与Fe3+反应,被氧化成蓝色的胆青素,绿色胆绿素和黄色胆黄素,出现绿色或黄绿色反应试剂酸性三氯化铁试剂(Fouchet试剂)、100g/L氯化钡溶液方法5ml尿+2.5ml氯化钡(混匀,3000rx3-5min,弃上清)+2滴Fouchet试剂结果长时间不变色—沉淀物渐浅绿+沉淀物绿++沉淀物立刻蓝绿+++假阳尿中大量药物如:牛黄、熊胆粉、水杨酸盐、阿司匹林等假阴Fouchet试剂加入过量6、尿胆原(改良Ehrlich法)原理酸性溶液中尿胆原的吡咯环能与对二甲苯氨基苯甲醛(Ehrlich试剂)作用后成樱桃红色反映,其颜色变化与尿胆原含量成正比试剂Ehrlich试剂方法2ml无胆红素尿液+0.2mlEhrlich试剂(混匀,静置10min)观察方法白色背景,从试管口垂直从上往下看结果长时间不变色—10min后浅红+10min后樱桃红++立刻樱桃红+++假阳尿中含吡啶、酮体等(加入戊醇保持红真阳,变浅绿假阳)locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 假阴尿胆原易被氧化为尿胆素(所以标本应新鲜送检)尿中含维生素C、甲醛、乌洛托品等(抑制反应)5、尿有形成分参考范围:细胞:RBC:0-3/HPFWBC:0-5/HPF扁平上皮细胞:少许(女可为多见)/HPF移行上皮细胞:偶见/HPF管型:透明管型:0-1/HPF结晶:尿酸盐、碳酸盐、磷酸盐:少许/HPL八、粪便常规1、外观:颜色:黄褐色,黄色,金黄色,鲜红色,暗红色,柏油样,灰白色,绿色形状:软,硬,糊状,粘液状,胨状,泡沫样,水样,血样,米泔样,柏油样等寄生虫:查见与否2、镜检细胞,脂肪球,寄生虫等3、便隐血locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 免疫法(单克隆抗体胶体金法)原理:双抗体夹心免疫层析(单抗抗人血红蛋白-人血红蛋白-多抗抗人血红蛋白)特点:灵敏性特别高九、生殖系统分泌物检查1、精液精子计数试剂标本配制计数计算精子稀释液:碳酸氢钠(破坏精液粘稠性)甲醛(固定精子,定量稀释)1h以上已经液化的精液0.38ml稀释液+20μl精液(稀释20倍)同RBC计数Nx5x10x20x106/L=Nx109/L2、阴道分泌物清洁度:第104页线索细胞(加德纳菌)阴道毛滴虫真菌染色:革兰染色十、脑脊液,浆膜腔积液1、外观:颜色,透明度,凝固性(有无凝块,薄膜)locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame 2、细胞总数计数(直接计数,也可以用红细胞稀释液稀释后计数)10个大方格3、白细胞计数(冰乙酸破坏RBC)4、脑脊液蛋白质定性(潘氏试验Pendytest):原理苯酚与脑脊液中的蛋白质(球蛋白为主)结合形成不溶性蛋白盐沉淀,沉淀量与蛋白量成正比试剂5%苯酚溶液方法2-3ml苯酚+垂直滴入1-2d脑脊液+立即黑背景观察结果清晰透明—微白雾状±灰白云雾+白色浑浊++白色絮状或沉淀+++立即白色沉淀++++假阳苯酚试剂不纯,器材不干净5、浆膜腔积液蛋白质定性原理黏蛋白是酸性糖蛋白,在稀乙酸中可凝结出现白色沉淀试剂冰乙酸方法100ml水+2-3d冰乙酸(混匀)+黑色背景直接垂直滴加2-3滴浆膜腔积液假阴冰乙酸过量locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame

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