一种椎间盘组织总rna提取的改良方法

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1、万方数据四川医学2009年11月第30卷(第1I期)漱啪胝眦伽刊，2009。眦30，№lI·1687·●基础与实验研究●一种椎间盘组织总RNA提取的改良方法郑雪莲，辜俊△，赵献峰，史洵玮，何海宁，孙红，钟应佳(四川大学华西第二医院分子与转化医学实验室，四川成都610041)论著【摘要】目的改进传统常规法在椎间盘组织中总RNA提取。获得高质量的椎问盘组织总RNA。方法健康成年N哪l舳d白兔，完整取出椎问盘组织，随机分RNA传统方法组和酶消化改良组。传统组，按’Mzol法提取总RNA；酶消化改良组，加入O．2％Ⅱ型胶原酶

2、．置于细胞培养箱消化数小时，加入含小牛血清的PBs泣终止，离心收集细胞。余步骤同传统组。结果传统组，电泳结果未见28S和18S条带，5S条带部分可见；^260／280比值在1．5左右．蛋白多糖污染重。而酶消化组，电泳结果可见清晰的28S、18s和5S条带，且28S条带的亮度约是18S的两倍；A260／2舳比值在1．8—2，O之闻。无蛋白污染。此法提取的RNA，逆转录后可用于扩增B-a荫n基因。结论酶消化改良法可望成为椎间盘组织恶I州A提取的好方法。RNA片断完整，纯度高，无蛋白污染，不影响后续基因表达(RT-PcR)

3、的分析，并且重复性好，可以推广。【关键词】椎问盘组织；Ⅱ型胶原酶；RNA提取【中圈分类号】Q5-3I文献标识码】AI文章编号】1004JD50l【2009)11．1687舶An蛔pr们硼蛐tmeth硼硝麟tnlc吐哩to嘲砌呵A打哪印i地lm∞凼伽．刃ZEⅣC池-li明，G￡，．，如，Z删D瓜口n毋增，甜以删础删砌眦删删跏‰蠡Dry，黜c^姚删衲删矿酗啪啪嘶，踟劬，蹦啪610041．Cb厶纪【Ab细ct】obj删僧Toimpll口"themetbod0fex￡I弛tillgtotalRNA矗蝴8pinaldi8d88

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8、作之一，是分析基因表达的基础。高质量的RNA有助于更好的研究基因表达。椎间盘组织由纤维环和髓核组成，主要含有I型和Ⅱ型胶原分子，骨组织富含蛋白、多糖和胶原等致密基质，细胞含量少。用传统常规方法提取RNA比较困难，新近报道的液氮研磨法效果也不理想⋯。这一现状限制了相关研究的深入开展。Ⅱ型胶原酶主要作用于骨、软骨等组织的胶原分子，使其水解，对骨实质细胞无作用。我们采用Ⅱ型胶原酶消化法，改进椎间盘组织总RNA的提取，获得了较满意的结果，现报告如下。1材料与方法1．1材料与仪器：健康成年雄性Newsl蚰d白兔一只，△通讯作者

9、4．6kg，购于四川大学华西校区实验动物中心，DEPC(Si鲫a)，Ⅱ型胶原酶(Si孕眦)，M·MLV逆转录试剂盒(儆ala)，引物B一舵tin(invitrlDgen合成)，Mad【er(in—vi唧)，低温冷冻离心机，(He豫eus)，制冰机(S蚰yo)，电泳仪(Bio-饱d)，凝胶成像分析系统(Bio一豫d)，PCR仪(MJRe鸵al℃h