高效液相色谱法测定保健食品中大豆异黄酮

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1、维普资讯http://www.cqvip.com322中国卫生检验杂志2006年3月第l6卷第3期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Mar2006；v0116N03【化学测定方法】高效液相色谱法测定保健食品中大豆异黄酮王岙，于文海“，杨明远，白梅。张丽薇，姜楠(1．吉林省卫生监测检验中心，长春130062；2．水利部松辽水利委员会，长春130021)[摘要]目的：建立测定保健食品中大豆异黄酮含量的高效液相色谱法。方法：通过对流动相的优选，以甲醇：水=3：2为流动相，使染料木素

2、、大豆苷元、大豆甙、染料木甙4种大豆异黄酮主要成分达到较好的分离效果，可分别测定4种成分含量及以此4种成分为主要成分的保健食品中大豆异黄酮含量。结果：方法的最低检出浓度分别为大豆甙1．9g／ml、染料木甙1．2g／ml、大豆苷元1．0g／ml、染料木素0．8g／ml；标准曲线线性范围分别为1．9100g／ml、1．2—100g／ml、1．0—170g／ml、0．8～140g／ml；方法平均回收率分别为99．1％、98．5％、97．5％、98．8％；相对标准偏差均(10％。结论：建立的方法可准确、快速的测定大豆异黄酮的含量。[关

3、键词]保健食品；大豆异黄酮；染料木素；大豆苷元；大豆甙；染料木甙；高效液相色谱法[中图分类号]0657．72[文献标识码]A[文章编号】1004—8685(2006)03—0322—03大豆异黄酮是以大豆为原料提取制成的植物雌性激素，1．3操作步骤作为一种优良的天然抗氧化剂，长期服用可降低心血管病的1．3．1样品前处理方法发病率，并有防癌抗癌功效，对于妇女更年期综合症和骨质疏l_3．1．1固体样品准确称取固体样品0．5—1．0g于松症治疗效果显著⋯。目前发现大豆异黄酮分为游离型的甙100ml容量瓶中，定量加入80％乙醇，经超声

4、提取30rain，加元和结合型的糖甙两类，其中以染料木素(genistein)、大豆苷80％乙醇补至刻度，取上清夜，用0．45m膜过滤，注入具塞元(daidzein)两种甙元为主要活性成分，研究进一步发现其主试管中，待测。要成分大豆甙(daidzin)、染料木甙(genistin)在强酸高温或酶1．3．1．2液体样品准确吸取液体样品1．0～2．0ml于存在条件下可以脱去葡萄糖苷键，得到游离态的染料木素100ml容量瓶中，用80％乙醇定容至刻度，用0．45m膜过(genistein)、大豆苷元(daidzein)，因而同样具有开

5、发价值j。滤，注入具塞试管中，待测。因此确立能够同时检测异黄酮甙元和相应的糖甙的方法十分1．4标准曲线制作重要。F1前，大豆异黄酮的检测方法有薄板层析法J、紫外分各吸取不同体积的标准溶液于10ml容量瓶中，加甲醇定光光度法、高效液相色谱法HJ，薄板层析法能较好地进行容至刻度，混匀。按仪器色谱条件测其峰面积，绘制峰面积一定性分析，判断试样中是否含有大豆异黄酮，但定量检测精度各成分含量标准曲线。不够；紫外分光光度法可定量测定出总异黄酮的含量，但不能1．5色谱条件判断出样品中各组分的构成情况；高效液相色谱法一般只测色谱柱：Diamo

6、nsilC250mmx4．6mm，5m；流动相：定一种或两种成分。而由于加工和提取方法的不同，样品中甲醇：水=3：2；流速：1．0ml／min；柱温：35~C；检测波长：大豆异黄酮有效成分也不同，而且还没有标准的检测方法，为254nm；进样量：10。了适合各方面的需要，我们研制了高效液相色谱法同时测定1．6样品测定染料木素(genistein)、大豆苷元(daidzein)、大豆甙(daidzin)、各吸取样品溶液及标准溶液1O进入液相色谱仪测定染料木甙(genistin)4种成分。其峰面积，样品与标准系列比较定量。1材料与方

7、法2结果与讨论1．1仪器2．1方法的线性范围高效液相色谱仪，具紫外检测器；迪马钻石柱(C)；超声取不同浓度的各标准溶液按方法测定其峰面积，绘制峰波振荡器；紫外可见分光光度计。面积一浓度标准曲线，标准曲线线性范围分别为大豆甙1．9—1．2试剂100g／ml、染料木甙1．2～100g／ml、大豆苷元1．0—甲醇(色谱纯)；乙醇(分析纯)；大豆甙(daidzin)标准溶170g／ml、染料木素0．8—140~g／m]，线性相关系数r值分别液：O．10mg／ml；染料木甙(genistin)标准溶液：0．10mg／ml；大为0．999

8、0、0．9994、0．9995、0．9999。豆苷元(daidzein)标准溶液：0．23mg／ml；染料木素(genistein)2．2检出限标准溶液：0．34mg／ml；乙睛(色谱纯)；KH2PO溶液：按仪器噪音的三倍计算其最低检出浓度分别为大豆甙0．02mol／L1．9