丹参枳术饮对stc大鼠肠道肌间神经丛内vip、sp表达的影响

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1、万方数据主国中医急症2010年10月第19卷第lo期JETCM．Oct．2010，V01．19，No．10丹参枳术饮对STC大鼠肠道肌间神经丛内VIP、SP表达的影响宰郑晨果△叶乐驰金纯中图分类号：R285．5文献标志码：A文章编号：1004—745X(2010)10—1737—02【摘要】目的建立大鼠慢传输型便秘(STC)的动物模型。观察丹参枳术饮对STC大鼠的肠道肌间神经丛内VIP、SP神经细胞表达的影响。方法健康成年SD大鼠30只，按照随机化原则分为正常组10只，模型组lO只，治疗组IO只

2、。正常组、模型组予生理盐水灌胃。治疗组予丹参枳术饮灌胃。15d为l疗程。取大鼠大肠(盲肠至肛门上方2cm)，石蜡包埋，制作免疫组化染色。结果治疗组可增加因便秘而减少的VIP、SP神经阳性细胞数量。结论丹参枳术饮可以增加STC大鼠的肠道肌间神经丛内VIP、SP含量。【关键词】慢传输型便秘大黄丹参枳术饮VIPSP慢传输型便秘(slowtransitconstipation，STC)又称结肠无力，属肠道动力障碍性疾病，发病率呈逐年上升趋势，现占慢性功能性便秘的45％。全国名中医金定国依据发病机制，并且

3、结合自己的临床经验，应用以丹参209，白术209，枳实209，麻仁209组成的中药方剂丹参枳术饮治疗便秘。在I临床上取得了满意的疗效⋯。本实验用大黄粉制作出结肠慢传输模型，通过免疫组化来检测rIP、SP在治疗后模型鼠结肠肌间神经丛内的蛋白表达。研究该方药可能的作用机制，为临床防治STC提供有意义的理论依据。l材料与方法1．1材料SP抗体及SAGS试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供，包括5％BSA封闭液，二抗：山羊抗兔IgG。链酶亲和素一生物素一过氧化物酶复合物(SABC)。VIP抗体及SAGS试

4、剂盒北京中山公司提供。丹参枳术饮(组成：丹参、炒枳壳、生白术、火麻仁)由温州医学院附属二院药房提供。1．2分组与造模12J选用健康成年SD大鼠·30只，体质量200—2509，清洁级，雌雄各半(温州医学院动物室提供)。按照随机化原则分为正常组10只，模型组10只，治疗组10只。正常组饲以普通软饲料。模型组、治疗组饲料中添加大黄粉，起始剂量为300rag／(kg·d)，每3天加药1次，递增至2700rag／(kg·d)时，约半数动物出现粥样便。维持此剂量直到粥样便消失，再按300mg／(kg·d)

5、递增，如此保持半数以上动物有下泻作用，饲养3个月，最终用量为5700mg／(kg·d)。停药l周后，通过活性炭灌胃法测定肠道传输功能，以确定模型是否成功。1．3给药所有大鼠每天给予足量食物和饮水，正常组、模型组灌胃生理盐水，剂量为20mL／kg。治疗组灌胃丹参枳术饮，剂量为249／kg生药。各组均每日给药1次，15d为l疗程。1．4病理检查取大鼠大肠(盲肠至肛门上方2cm)，生理盐水冲洗干净，放入10％中性甲醛液中固定24h，然后梯度酒精脱水，石蜡包埋。用连续横断面组织切片法切取厚41a,m的组

6、织块，温州医学院附属第二医院(温州325027)幸福州市科技计划项目(No．Y20072007)△通信作者·1737··实验研究·每张载玻片贴8个组织块，40。C10h烘干，进行免疫组化染色。SP、VIP免疫组织化学染色方法按照试剂盒说明书进行。1．5染色组化结果判定半定量分析标准为：所有视野未见阳性细胞为(一)；有少数弱阳性神经元为(+)，染色呈淡黄；阳性细胞较多见为(++)，染色呈棕黄；阳性细胞多见为(+++)，棕褐色。彩色病理图像分析：100倍光镜下每张铺片随机选取3—5个视野，计算阳性神

7、经的平均面密度(面密度是指目标面积占计场面积的百分比，反映阳性神经在铺片标本中的含量)。1．6统计学处理采用SPSSlI．5软件包进行统计分析。等级资料检验方法采用秩和检验，多组计量资料分析采用方差分析，数量以(面±5)表示。2结果2．I免疫组化染色见图I、图2、表l。免疫组化染色显示肌问神经丛各神经递质阳性表达的神经细胞呈棕黄色，细胞胞浆呈颗粒状。模型组各神经递质阳性表达的神经细胞数量较正常组明显减少(P<0．01)，而治疗组则较模型组有不同程度的增加(P<0．05)。2．22．2．1图I肌间

8、神经丛内VIP神经细胞阳性表达(光镜。×100)图2肌问神经丛内SP神经细胞阳性表达(光镜。x100倍)免疫组化染色半定量分析结果VIP阳性表达神经细胞半定量分析结果见表2。便万方数据·1738·表1各组大鼠VIP、SP神经面密度比较(％，i±s)中国中医急症2010年10月第19卷第10期JETCM．Oct．201巫V01．19，No．．10与模型组比较．·P<0．05，··P