SNT1151.4-2011虾黄头病检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１１５１．４—２０１１代替ＳＮ／Ｔ１１５１．４—２００３虾黄头病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉狊犺狉犻犿狆狔犲犾犾狅狑犺犲犪犱犱犻狊犲犪狊犲２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准虾黄头病检疫技术规范ＳＮ／Ｔ１１５１．４—２０１１中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７

2、５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张０．７５字数１７千字２０１１年１１月第一版２０１１年１１月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２２５８５定价１６．００元版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１１５１．４—２０１１前言ＳＮ／Ｔ１１５１系列标准共分为６部分：———虾桃拉综合征检疫技术规范；———对虾白斑病检疫技术规范；———斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）诊断方法；———虾黄头病检疫技术规范；———对虾杆状病毒（ＢＰ）检验方法；———对虾白斑病毒斑点杂交和原位杂交检测操作规程。本部分为ＳＮ／Ｔ１１５１的第４部分。本部分按照ＧＢ

3、／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本部分代替ＳＮ／Ｔ１１５１．４—２００３《对虾黄头病毒（ＹＨＶ）逆转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）检测方法》。本部分与ＳＮ／Ｔ１１５１．４相比，主要技术变化如下：———新增套式ＲＴＰＣＲ鉴别诊断方法；———新增ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ检测方法。本部分修改采用世界动物卫生组织（ＯＩＥ）的《水生动物疾病诊断手册》（２００９版）第２．２．７章。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：熊炜、蒋静、张强、刘荭、李健、王巧全

4、、邱璐、黄忠荣、胡永强。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：———ＳＮ／Ｔ１１５１．４—２００３。Ⅰ版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜１１５１．４—２０１１虾黄头病检疫技术规范１范围ＳＮ／Ｔ１１５１的本部分规定了虾黄头病ＲＴＰＣＲ和ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ检测的操作方法。本部分适用于虾黄头病流行病学调查、诊断、检疫和监测。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ１８０８８出入境动物检疫采样３概述虾黄头病（Ｙｅｌｌｏｗｈ

5、ｅａｄｄｉｓｅａｓｅ，ＹＨＤ）是一种由虾黄头病毒（Ｙｅｌｌｏｗｈｅａｄｖｉｒｕｓ，ＹＨＶ）引起的严重威胁虾养殖的疫病，其感染广泛、致死率高，是世界动物卫生组织（ＯＩＥ）规定的需上报的水生动物疫病。目前仅有斑节对虾和南美白对虾大规模爆发ＹＨＤ疫情的报道，但日本对虾、白对虾、南极磷虾等也能自然感染ＹＨＶ。ＹＨＶ属于黄头症候群病毒（Ｙｅｌｌｏｗｈｅａｄｃｏｍｐｌｅｘｏｆｖｉｒｕｓｅｓ），目前该群病毒有６个已知的基因型，ＹＨＶ（基因１型）是其中的一个型，并且是黄头病的唯一病原。鳃联病毒（Ｇｉｌｌａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＧＡＶ）属于基因２型。ＧＡＶ和其他几个型（基因３

6、型～６型）在东非、亚洲和澳大利亚的健康斑节对虾中比较常见，但很少引发疾病。ＹＨＶ为有囊膜的杆状病毒，其基因组为单正链ＲＮＡ。４试剂和材料４．１犜犪狇酶及１０倍犜犪狇酶反应缓冲液：犜犪狇酶浓度为５Ｕ／μＬ，－２０℃保存，避免反复冻融。４．２逆转录酶及１０倍逆转录酶反应缓冲液：逆转录酶浓度为５０Ｕ／μＬ，－２０℃保存，避免反复冻融。４．３ＲＮＡ酶抑制剂（４０Ｕ／μＬ）：－２０℃保存，避免反复冻融。４．４ｄＮＴＰ：含ｄＡＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＴＴＰ各１０ｍｍｏｌ／Ｌ，－２０℃保存。４．５ＲＴＰＣＲ引物：浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ，其序列如下：引物（１０Ｆ）：５’ＣＣＧ

7、ＣＴＡＡＴＴＴＣＡＡＡＡＡＣＴＡＣＧ３’；引物（１４４Ｒ）：５’ＡＡＧＧＴＧＴＴＡＴＧＴＣＧＡＧＧＡＡＧＴ３’；引物（ＧＹ１）：５’ＧＡＣＡＴＣＡＣＴＣＣＡＧＡＣＡＡＣＡＴＣＴＧ３’；引物（ＧＹ２）：５’ＣＡＴＣＴＧＴＣＣＡＧＡＡＧＧＣＧＴＣＴＡＴＧＡ３’；引物（ＧＹ４）：５’ＧＴＧＡＡＧＴＣＣＡＴＧＴＧＴＧＴＧＡＧＡＣＧ３’；引物（ＧＹ５）：５’ＧＡＧＣＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＴＧＡＧＡＧＡＡＣＡ３’；引物（Ｙ３）：５’ＡＣＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣ