1胡桃果皮提取液的除草作用探究

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1、核桃青皮中胡桃醌及其衍生物的高效分离摘要：针对胡桃采摘及加工过程中产生有毒有害废弃物现象，该项目以胡桃青皮为原料，索氏抽取后用层析法制取胡桃醌，并检测其纯度和转移率；用层析所得胡桃醌进行浸种和喷洒幼苗，观察和测量其对种子萌发及其幼株生长的抑制作用。结果显示：以氯仿作提取剂，经索氏抽取后反复硅胶柱层析，用氯仿和石油醚－乙酸乙酯(200:1)分阶段洗脱得到较纯的胡桃醌制备液，用EX-1600高效液相色谱仪测得的胡桃醌平均含量为0.39%，RSD=1.78%。1前言胡桃属于胡桃科胡桃属，学名胡桃(JuglansregiaL.)。胡桃在我国栽培历史长达两千多年，山西、河北、河南、山

2、东、陕西、甘肃、青海及新疆南部多有栽培。我国胡桃种植面积达到三千一百七十五万亩，产量近五十万吨，总面积和产量均居世界第一位。胡桃青皮含有丰富的1,8-桉叶素、胡桃醌、胡桃甙、金丝桃甙、挥发油等多种植物次生物质，具有明显的植物化感作用[4]。早在公元1世纪，普林尼[5]在《自然历史》中叙述了胡桃树的“树荫”是令人忧郁的，甚至会引起人的头痛和损伤种植在其附近的各种植物。R.FDavis从胡桃果和根中提取了胡桃醌，从而证实了普林尼所观察到的现象。我国老百姓也流传着这样一句俗语，“胡桃树下无丰草”。很显然胡桃的化感现象很早就被人们所认识，其危害也早已形成共识。胡桃青皮又称青龙衣，为

3、胡桃外部的一层厚厚绿色青皮。胡桃青皮中化学成分有39种挥发油和7种脂肪酸，其中挥发油占79.09%、脂肪酸占19.02%，其中的挥发油有烃类（26种、71.80%）、酮类（3种、10.83%）、醇类（6种、7.96%）、呋喃类（1种、5.79%）、酚类（1种、1.99%）、肟类（1种、0.95%）、酯类（1种、0.71%）七大类化合物[6]。1985年，许绍惠等[7]首次从胡桃青皮废弃物图1胡桃醌结构，中分离提纯出胡桃醌（植物化感物质）,实验结果显示：新鲜山胡桃青皮中胡桃醌含量较高，达到0.42%，随着存储时间的延长，4胡桃醌含量逐渐减少，存储9年的青皮中只含有0.09%。

4、另外，姚焕英等[8]人分析了胡桃青皮中的9种醌类衍生物。2材料与方法2.1材料、试剂与主要实验仪器2.1.1试验材料供试材料：胡桃青皮采集于山西省吕梁市离石区王营庄，为中科农1号。2.1.2试验试剂石油醚、乙酸乙酯、高锰酸钾、磷酸、磷酸二氢钠、氯仿均为分析纯，水为双蒸水、甲醇(色谱纯)．胡桃醌标准品。2.1.3主要试验仪器及用具主要仪器：KQ5200DB型超声机(江苏省昆山市超声仪器有限公司);FA2104N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；N－1000型旋转蒸发仪(EYELA上海爱朗仪器有限公司)；EX1600高效液相色谱系统(上海伍丰科学仪器有限公司)；离心机；粉碎

5、机。索氏提取器、锥形瓶（100mL）、容量瓶（10、100mL）、橡皮手套、镊子、培养皿、新华滤纸、金属筛、微型喷壶、尺子、放大镜、计算器、微孔滤膜（0.45µm）。（以上药品、仪器及用品均由吕梁学院生命科学系提供）2.2试验方法与步骤胡桃醌提取及含量测定方法剥取新鲜胡桃青皮（带上橡皮手套，因为对皮肤氧化能力很强），置室温下自然干燥7d，待彻底干燥后于粉碎机彻底粉碎，80目金属筛过筛。含量测定方法的建立。色谱条件：色谱柱为Exformma柱(4.6×200mm，5µm)，流动相为甲醇:水(55:45)，水相用磷酸调PH值约为3.5(磷酸:水为1:500)，流速为0.8mL/

6、min，检测波长为250nm，柱温为30℃。标准曲线的绘制：精密称取胡桃醌标准品，加甲醇溶解并稀释成浓度为1.210mg·mL-1的溶液，用移液管分别取0.5、1、1.5、2.5、5mL置于10mL的容量瓶，用甲醇稀释至刻度，浓度为0.0605、0.1210、0.1815、0.3025、0.6050mg·mL－１4，分别取10µl依次进样，以峰面积值对样品浓度绘制标准曲线为Y=809630X-20.41，r=0.9995，线性范围0.0605mg·mL-1~0.6050mg·mL－１。供试液的制备：精密称取青皮粉末1g，用滤纸包裹，防止泄露。置于索氏提取器中，加90mL氯仿

7、，水浴加热提取至溶液无色为止，过滤后置于100mL的容量瓶中，用少量氯仿洗涤索氏提取器，过滤后并入容量瓶中，用氯仿定容至刻度，混匀。用移液管精取10mL，置10mL离心管中、水浴蒸干，温度设定为40℃。加甲醇3mL超声提取10min，4000r·min-1离心10min后取上清液，再用甲醇3mL提取2次，合并上清液于10mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度。进样前用0.45µm微孔滤膜（有机系滤膜）过滤。3结果与分析3.1胡桃醌提取及含量测定胡桃醌标准品的色谱图图4胡桃醌标准品色谱图图5供试样品色谱图优化梯度洗脱条件，