分子生物学 讲义(2011-2012-2)

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1、实验课程教学讲义单位生命科学与技术学院2011-2012学年度第2学期专业生物技术班级2009级3/4/5/6班考试科目分子生物学实验任课老师姜立春制定（修改）日期2012年2月20日21分子生物学实验室使用规则1.进入实验室的实验人员，必须听从任课教师的安排，班级干部负责和督促安全和卫生工作，每个学生要严格遵守。2.必须严格执行仪器设备运行记录制度，记录仪器运行状况、使用时间及使用人员等。发现仪器有故障者，有义务立即向认可老师、管理员或实验室主任报告，严禁擅自处理、拆卸、调整仪器主要部件，凡自行拆卸者一经发

2、现将给予严重处罚。仪器用后切断电源，各种按钮回到原位，并做好清洁工作。3.实验室公用物品用完之后按原样放回，不得擅自借出或带出到其它实验室。在确实需要的情况下，应向实验室管理人员提出请求。4.使用易燃易爆气体时，盛装气体的气瓶应与实验室相应设施隔离。使用电炉、酒精灯等要远离化学易燃物品。5.所有实验室存储的样品、试剂必须如实写好标签，如样品应有样品名称、存放时间、存放人。配制的试剂应有试剂名称、浓度、配制时间和配制人等。6所有在实验室冰箱或冰柜里存放的物品用完后需及时处理。实验室管理人员将定期清理无标识和过期

3、的样品。7.实验室使用有毒物质或进行能产生有危害气体的实验，应在不燃结构的通风橱内进行。8.实验过程所产生的感染性培养物、菌株及相关生物制品及其它具感染性实验室废弃物，应视为医疗垃圾进行相应的特定处理。9.带有放射性的废弃物必须放入指定的具有明显标志的容器内封闭保存，报有关部门统一处理。10.实验室内禁止吸烟、用餐，保证通风洁净，闲杂人员不得入内。11.实验工作完毕后，做好整理工作，关闭电源、水源、气源和门窗。12.实验室人员应保证消防通道畅通，消防设施齐全。如发生意外事故，应立即采取必要措施，并及时报告实验

4、室负责人、值班人员和报警。仪器使用注意事项分子生物学操作中会涉及一系列仪器，使用不当导致实验失败、减少仪器使用寿命或损坏仪器。因此在进行操作前细致地了解各种仪器的使用方法及注意事项，是使后继实验事半功倍的一个必要准备。冷冻离心机低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中，都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机已成为分子生物学研究中必需的重要工具。使用方法：1.离心机应放置在水平坚固的地板或平台上，并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器

5、震动。2.打开电源开关，按要求装上所需的转头，将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上（离心筒须与样品同时平衡），关闭机盖。3.21按功能选择键，设置各项要求：温度、速度、时间、加速度及减速度，带电脑控制的机器还需按储存键，以便记忆输入的各项信息。4.按启动键，离心机将执行上述参数进行运作，到预定时间自动关机。5.待离心机完全停止转动后打开机盖，取出离心样品，用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁，待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。注意事项：1.机体应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求

6、有良好的接地线。2.开机前应检查转头安装是否牢固，机腔有无异物掉入。3.样品应预先平衡，使用离心筒离心时离心筒与样品应同时平衡。4.挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏，以免腐蚀机腔或造成事故。5.擦拭离心机腔时动作要轻，以免损坏机腔内温度感应器。6.每次操作完毕应作好使用情况记录，并定期对机器各项性能进行检修。7.离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。附：相对离心力与每分钟转速的换算离心机的转速，在以前实验资料中一般以每分钟多少转来表示。由于离心力不仅为转

7、速函数，亦为离心半径的函数，即转速相同时，离心半径越长，产生的离心力越大。因此仅以转速表达离心力是不够科学的，近年来主张用相对离心力（RCF）来表示比较合理。现在国际资料中，已改用相对离心力来表示。两者的互换公式如下：N=RCF×105/1.18×RRCF=0.00001118×R×N2N表示转速，单位为转/分（r/min）；R表示离心半径，即离心管底端至轴心的距离，单位为厘米（cm）；RCF表示相对离心力，单位用重力加速度Xg(g=9.8m/s2)。电泳仪：电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电

8、泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳。所谓电泳，是指带电粒子在电场中的运动，不同物质由于所带电荷及分子量的不同，因此在电场中运动速度不同