山姜素对溃疡性结肠炎肠上皮屏障作用的影响

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1、分类号：R574.1单位代码：10159密级：公开学号：201410230博士学位论文中文题目：山姜素对溃疡性结肠炎肠上皮屏障作用的影响英文题目：EffectsofAlpinetinonintestinalepithelialbarrierinulcerativecolitis论文作者：谭悦指导教师：郑长清教授学科专业：内科学完成时间：2017年2月中国医科大学博士学位论文山姜素对溃疡性结肠炎肠上皮屏障作用的影响EffectsofAlpinetinonintestinalepithelialbarrierinulcerativeco

2、litis论文作者谭悦指导教师郑长清教授申请学位医学博士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科内科学研究方向炎症性肠病论文起止时间2015年7月—2017年2月论文完成时间2017年2月中国医科大学（辽宁）2017年3月中国医科大学博士学位论文摘要目的：炎症性肠病（inflammatoryboweldiseases,IBD）是一组肠道慢性非特异性炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）和克罗恩病（Crohn’sdisease,CD），以肠道炎症和黏膜损伤为特点。近年来，IBD的发病率显著增加，尤

3、其是UC患者。研究表明，免疫紊乱和氧化应激反应是IBD发病的主要机制，近年研究发现，肠上皮屏障功能障碍在IBD发病中亦发挥重要作用。紧密连接（tightjuction,TJ）是肠上皮屏障最重要的组成部分，其表达异常能引起肠上皮屏障通透性增加，导致肠腔内致病性抗原，如细菌、病毒、内毒素等物质进入黏膜固有层和血液循环，引发炎症和免疫反应。IBD的治疗目标是诱导并维持临床缓解及肠道黏膜愈合。研究显示，IBD患者肠黏膜TJ蛋白表达异常可发生于IBD早期阶段和复发之前，并促进疾病进展，故TJ的完整性可能对黏膜愈合发挥重要作用。TJ是由多种蛋白

4、组成的复合体，包括跨膜蛋白、外周膜蛋白以及细胞股骨架蛋白等。其中，claudins和occludin蛋白是跨膜蛋白的主要成员，负责调控紧密连接的通透性和维持细胞极性，ZOs是外周膜蛋白家族，主要通过连接claudins、occludin以及细胞骨架蛋白，维持了TJ复合体的完整性。多项研究显示IBD患者肠黏膜TJ蛋白occludin、ZO-1表达下降，而成孔蛋白claudin-2表达升高，导致肠黏膜通透性增加。目前，IBD的治疗药物主要有抑炎药物、免疫抑制剂、生物制剂等，存在耐药、副作用多或价格昂贵的缺点，故寻找治疗新策略及新药物成为

5、当今IBD领域的研究热点。山姜素(Alpinetin)作为中国传统中药，来源于姜科植物草豆蔻，为黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等生物活性。有研究显示，山姜素可减轻小鼠实验性急性肺损伤和结肠炎，但目前尚无山姜素对炎症性肠病肠黏膜屏障作用及机制的相关研究。本研究旨在探讨山姜素对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠上皮TJ蛋白的作用和相关机制，并探讨UC患者肠道黏膜愈合与TJ蛋白表达关系，为IBD的治疗提供新的策略及理论基础。研究方法：1.溃疡性结肠炎患者肠道黏膜愈合与紧密连接蛋白表达关系I中国医科大学博士学位论文的研究。实验对象

6、的选择：本院消化内科明确诊断为UC患者，作为观察组，收集临床资料和结肠组织标本，诊断标准按“炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2012，广州）”；同期诊断为结肠息肉或结肠癌行手术切除的患者为对照组。收集手术切除后经病理学证实的正常断端结肠组织。观察组按照MCS分为4组，即临床缓解组、轻度活动期组、中度活动期组、重度活动期组。通过免疫组化和RT-PCR法检测研究对象紧密连接蛋白occludin、ZO-1、claudin-2的表达情况，并分析其与黏膜愈合指标的相关性。2.不同浓度山姜素对溃疡性结肠炎小鼠保护作用的研究。选用雄性8-10周C

7、57BL/6小鼠42只，随机分为正常对照组、单纯山姜素组（Alpinetin100mg/kg)、3%DSS组、低浓度山姜素组（3%DSS+Alpinetin25mg/kg)；中浓度山姜素组（3%DSS+Alpinetin50mg/kg)组；高浓度山姜素组（3%DSS+Alpinetin100mg/kg)组，5-ASA组（3%DSS+5-ASA200mg/kg），共7组，每组6只，山姜素采用灌胃治疗。根据各组小鼠实验期间一般情况、体重改变、DAI评分、肠管长度、组织学评分以及透射电镜观察上皮细胞紧密连接等情况，研究不同剂量山姜素对溃疡

8、性结肠炎小鼠的治疗效果以及对肠上皮细胞间连接的作用。3.山姜素对溃疡性结肠炎小鼠肠上皮屏障保护作用的研究。通过建立不同剂量山姜素（25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg）灌胃治疗DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型，应用免疫组织