土壤酶的测定方法

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1、参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法一、土壤蔗糖酶3，5-二硝基水杨酸比色法：1、试剂的配制①3，5-二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）②pH5.5磷酸缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078gKH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。③8%蔗糖溶液。④甲苯。⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，

2、真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5mlpH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液1ml，注

3、入50ml容量瓶中，加3ml3，5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。葡萄糖（毫克

4、）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5-二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。②甲苯。①pH5.6磷酸盐缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078gKH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。②3，5-二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）③麦芽糖（C1

5、2H22O11.H2O）标准溶液：配制每毫升含0.02—2mg麦芽糖液为标准液。标准曲线绘制：分别取不同浓度麦芽糖标准液1ml，移于50ml容量瓶中，加2ml3，5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却。定容后在分光光度计上于波长508nm处进行比色。2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入10ml1%淀粉溶液，再加10mlpH5.6磷酸盐缓冲溶液和5滴甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。培养结束后，将悬液迅速过滤。从中吸取滤液1

6、ml，注入50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线的显色方法进行比色测定。为了消除土壤中原有的蔗糖、麦芽糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数三、土壤脲酶靛酚比色法:1、试剂配制：①甲苯。②10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。③柠

7、檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾分别溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000ml。④苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水中（B液）。将AB溶液保存在冰箱中。使用前将A、B溶液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。⑤次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。⑥氮的标准溶液：精确

8、称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。标准曲线绘制：吸取配置好的氮溶液10ml，定容至100ml，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13ml移至50ml容量瓶，加水至20ml，再加入4ml苯酚钠，仔细混合，加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲