三个藏药中抗脑缺血活性成分药效研究

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1、国内图书分类号：R965.1密级：公开国际图书分类号：西南交通大学研究生学位论文三个藏药中抗脑缺血活性成分药效研究年级2015级姓名吴莹申请学位级别医学硕士专业药学指导教师谭睿教授二零一八年五月ClassifiedIndex:R965.1U.D.C:SouthwestJiaotongUniversityMasterDegreeThesisEVALUATIONONAMELIORATIVEEFFECTOFACTIVECOMPONENTSFORCEREBRALISCHEMIA/REPERFUSIONINJUREINTIBETANMEDICINESGrade:2015Candid

2、ate:WuYingAcademicDegreeAppliedfor:MasterofMedicineSpeciality:PharmacySupervisor:Prof.TanRuiMay.2018西南交通大学硕士研究生学位论文第I页摘要脑缺血类疾病，作为常见的高危高发病，已经受到广泛的关注。从目前脑缺血类疾病的防治来看，无论是致病理论还是防治的手段的研究，藏医药都有着独道的优势及鲜明的特点。藏医传统名方如意珍宝丸、二十五味珊瑚丸、二十味沉香丸，在多年的脑缺血类疾病临床防治及研究中，疗效显著。但因其处方由多种单味药材构成，化学成分物质基础复杂，所以机制研究进展相对缓慢。

3、基于以上特点，本研究采用血清药物化学的方法，利用HPLC追踪并指认三个藏药中部分入血活性成分，同时MCAO法手术制做大鼠右侧大脑缺血再灌注（I/R）动物疾病模型，对三个藏药中活性单体进行抗脑缺血药效评价。方法：（1）三个藏药体内外成分分析：将三个藏药按照不同给药剂量，灌胃给予大鼠体内,并于灌胃后1h收集含药血清。采用血清药物化学的方法，利用HPLC分别于250nm和400nm下，对三个藏药体内、外生物样本进行分析，并与25个对照标准品比对，追踪指认入血的单体活性成分。（2）单体A抗脑缺血药效评价：SD大鼠随机分成6组，即假手术组、I/R组、阳性药组、单体A低、中、高剂量组

4、，每组18只动物。假手术及I/R组大鼠均采用生理盐水灌胃，阳性对照组大鼠灌胃尼莫地平混悬液（18.9mg/kg），单体A各实验组按照10mg/kg、30mg/kg、50mg/kg的剂量梯度进行给药，各组均给药1次/d。预防性用药3d，各组实施相应手术操作，并于术后连续用药5d。于末次给药后，采集血清及脑组织样本，进行TTC染色、脑含水量测定、组织病理学检查（HE染色、TUNEL染色、尼氏染色）、炎症因子检测（TNF-α、IL-6、IL-1β）、氧化应激水平检测（SOD、MDA）、凝血因子XII检测及BBB通透性等多角度评价。（3）单体B抗脑缺血药效评价：SD大鼠分为6组，

5、每组12只，单体B各组按照10mg/kg（低）、30mg/kg（中）、50mg/kg（高）的剂量梯度进行给药，其余设置均同单体A实验。从TTC染色、脑含水量测定、组织病理学检查及氧化应激水平检测等方面对单体B进行考察。结果：（1）血清药物化学研究结果：三个藏药体内、外生物样本与标准品HPLC图谱比对，指认出三个藏药体外生物样本共有峰14个，其中较大峰有6个，另有6个较大共有峰未能指认；指认出三个藏药体内生物样本共有峰6个，另有5个共有峰暂时无法指认，疑似代谢物。综合比较三个藏药体内、外生物样本，发现指认出以原型入血西南交通大学硕士研究生学位论文第II页的活性成分有6个。（

6、2）单体A对I/R大鼠的药效评价结果：50mg/kg组（高），能够显著降低I/R大鼠病灶部位脑梗死面积及脑含水量；改善尼氏小体损伤，同时TUNEL阳性细胞数显著减少，发挥出明显的抑制细胞凋亡作用；显著下调TNF-α、IL-6、IL-1β在大鼠血清及局部病灶脑组织中的表达，有效抑制并缓解血清及脑组织中神经炎症反应；显著下调病灶侧脑组织中AQP-4和MMP-9的表达，上调ZO-1的表达，改善脑水肿且对BBB起到一定的保护及修复作用；显著上调血清及局部病灶脑组织SOD活性，下调MDA的表达，从而改善氧化应激损伤。此外，各组大鼠血清中凝血因子XII的表达无显著性差异，说明口服10

7、mg/kg（低）、30mg/kg（中）、50mg/kg（高）剂量梯度的单体A，不会造成明显的凝血现象。（3）单体B对I/R大鼠的药效评价结果：单体B能够有效改善I/R损伤，且呈剂量依赖关系。50mg/kg组（高）单体B能显著降低病灶侧脑梗死面积和含水量，此外尼氏小体数目显著增加，TUNEL阳性细胞数显著减少，同时SOD表达显著上调、MDA表达显著下调。结论：单体A及单体B均能有效改善大鼠I/R损伤，其共同机制与减小病灶部位脑梗死面积，降低含水量改善脑水肿，改善尼氏小体损伤，抑制细胞凋亡，改善机体氧化应激损伤等有关。同时，单体A