白藓组织培养及无性系建立的研究

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1、白藓组织培养及无性系建立的研究作者：韩莹，王悦，丁莲，李永德，姜长阳【摘要】　　目的对白藓资源进行种质保存，满足人们栽培对种苗的需求。方法以白藓嫩茎为材料，以植物组织培养方法为手段，进行了愈伤组织诱导，愈伤组织和不顶芽分化，试管苗生根，试管苗移栽、扦插和移植的研究。结果1/2MS+·L-1+～·L-1为嫩茎愈伤组织的诱导培养和继代培养的理想培养基；MS+·L-1+·L-1+·L-1是嫩茎愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基；1/3MS+～·L-1是生根培养和试管苗生根继代培养的理想培养基；移栽的试管苗保持了野生白

2、藓的所有生物学性状，成功地建立起白藓的无性系。结论嫩芽诱导的愈伤组织建立的无性系能对其进行种质保存，所繁殖的种苗能满足人们栽培的需求。【关键词】白藓；愈伤组织；无性系；快速繁殖白藓Dictamnusdasycarpus，又称八股牛，属于芸香科白藓属多年生草本植物，生长于山坡、林下、林缘和草地。在我国的东北、华北、西北和华东等地有分布，朝鲜、蒙古和俄罗斯也有分布［1～3］。白鲜叶可提取芳香油；根茎作农药用，可防治多种病虫害；根皮入药，具有解毒、祛热、利尿、除湿和杀虫等功效，能治皮肤瘙痒、湿疹、黄水疮、黄疸、肝炎和阴

3、部瘙痒等疾病［3～5］。由于白藓既可作无公害的农药，又是治疗多种疾病的中药，从而出现了人们大量采收，数量越来越少的现象。于是，辽宁南部地区有人试图对其进行栽培，但由于人们长期地过量采挖，已经难以收集到种子，只能将有限的野生植株挖回来作为种苗，这又使数量非常少的野生白藓资源遭到了破坏。于是，我们对白藓进行了组织培养及无性系建立的研究，以期满足人们栽培对种苗的需求。虽然已多有芸香科植物组织培养研究的报道［6～9］，但迄今未见的报道。本研究以白藓的嫩茎为材料，成功地诱导形成愈伤组织，建立起无性系。　1材料材料及灭菌五月

4、上旬至中旬，将林缘草地上长势非常旺盛的白藓嫩茎切下后，放到500ml的磨口广口瓶中，用自来水振荡洗涤30min左右，再用%安利洗涤液振荡洗涤20min左右，然后移到超净工作台上，用70%～75%的乙醇灭菌约1s后，迅速用无菌水振荡洗涤2次，倒入%HgCl溶液振荡灭菌min，接着用%HgCl溶液振荡灭菌min，再用无菌水振荡洗涤6次漓干后，将装有材料的瓶子置于27℃的温箱中放置2h，然后再用%HgCl2灭菌min，接着用无菌水洗涤6次。即可获得白藓无菌嫩茎。培养条件以MS，1/2MS，1/3MS为基本培养基，附加不

5、同种类不同浓度的BA，IBA，IAA，NAA和2,4-D。以MS为基本培养基加蔗糖30g·L-1，以1/2MS为基本培养基加蔗糖1g·L-1，以1/3MS为基本培养基加蔗糖10g·L-1。培养基胨力强度为180g/cm2［10］，pH为～，培养温度20～25℃，光照度000Lx左右，光照10～1h·d-1。方法.1不同培养基对愈伤组织的诱导的影响将无菌嫩茎用解剖刀切成长约的无生长点茎段，接种到附加不同浓度BA、IBA、NAA的1/2MS培养基上，进行愈伤组织的诱导培养。培养到50d时观察统计培养结果。嫩茎愈伤组织

6、的诱导试验重复了3次，每次试验继代培养5代。.2不同激素愈伤组织分化的影响　　将继代培养4d生长一致的愈伤组织颗粒分散成独立的颗粒后，接种到以MS+·L-1为基本培养基，附加不同浓度BA、2,4-D或NAA的培养基中，进行愈伤组织的分化培养。每种培养基接种100个愈伤组织颗粒，统计观察分化率和分化不定芽的生长状况。.3不同浓度IAA对不定芽生根的影响把上述继代培养的丛生状、生长旺盛、高以上的不定芽从基部剪下，接种到以1/3MS为基本培养基，附加浓度分别为，，0.，，，·L-1和·L-1的IAA培养基上，进行不定芽

7、的生根培养。生根实验重复了3次，每次试验接种200个不定芽。.4试管苗的移栽、扦插把继代培养的生根试管苗培养瓶移到日光温室中，除掉培养瓶瓶塞，在4000～7000Lx光照下炼苗d，用镊子将试管苗取出，在清水中洗去根部培养基后，移栽到上面分别铺着一层厚为6～cm的河沙、珍珠岩、山皮土、园土、炉灰渣5种移栽基质、下面为肥沃园土的温室苗床上。移栽后前1d保持相对湿度为95％左右、温度20～28℃、没有直射光的条件。　　把经过上述炼苗d的试管苗取出后，剪成长2cm左右，至少具有两个腋芽或一个顶芽和两个腋芽的茎段后，将最下

8、面的一个叶片剪掉后，把下部切口在浓度为90mg·L-1的IAA溶液中浸泡处理4～min后取出，直接扦插到上面覆盖着一层上述五种事先已经浇透水的移栽基质的苗床上，并采用与移栽相同的条件进行管理。　3结果.1不同培养基对愈伤组织的诱导的影响由表1可见，接种到附加不同浓度BA、IBA的培养基中不能诱导形成愈伤组织；接种到附加不同浓度BA、NAA的培养基上都能诱导形成愈伤组织。但