医药学临床医学毕业论文 实时荧光pcr检测乙肝病毒dna的临床意义

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号:XXXXXXXXX姓名:XXX专业:医药学临床医学论文题目:实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义指导老师:XXX二〇一一年十二月十日[摘要]目的:对实时荧光定量PCR测定的472例HBVDNA结果进行分析,以探讨其临床价值。方法:对472份临床血清标本用ELISA法进行定性检测,并依据乙肝两对半定性结果进行归类分组,再用实时荧光PCR定量检测。结果:92份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中有89份HBVDNA为阳性,阳性率为96.7%,其PCR定量拷贝数为(3.23±1.45)×107/ml;168份HBsAg(+

2、)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有118份HBVDNA阳性,阳性率达到70.2%,PCR定量拷贝数为(4.65±2.10)×105/ml;32份HBsAg(+)、HBcAb(+)标本中有11份HBVDNA为阳性,阳性率为34.4%,PCR定量拷贝数为(1.92±1.54)×104/ml;62份HBsAb(+)的标本HBVDNA阳性2例,阳性率为3.2%,PCR定量拷贝数为(5.45±1.14)×103;60份全阴性的标本HBVDNA阳性1例,阳性率为1.7%,PCR定量拷贝数为(2.36±1.12)×104/ml。结论:PCR定量测定HBVDNA可以真实反映体

3、内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。  [关健词]实时荧光;PCR;乙肝DNA  乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病,它是由乙肝病毒(HBV)感染引起的。全世界乙肝携带者达5亿之多,我国是乙肝携带者高于人群的10%。急性乙肝中有20%会转为慢性,进而可能发展为肝硬化和肝癌,因此,准确、迅速诊断对乙肝的治疗和预后显得极为重要。荧光PCR技术融合了PCR和DNA探针杂交技术的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化,而且整个实验过程均在完全封闭的状态下进行,不需要PCR的后处理和电泳检测,解决了PCR定量和防污染等问题,而且具有快速、准确、特异等优点。

4、本文以472例血清标本分别用ELISA法和实时荧光PCR法分别对乙肝标志物和HBV进行检测,报告如下。  1 资料与方法  1.1 血清标本来源 472份血清标本均取自2005年1月至2005年10月我院门诊及住院的患者。其中,男245例,女227例;平均年龄35.2岁。  1.2 血清标本的采集 采用灭菌的一次性带盖塑料管,清晨空腹抽取静脉血5ml,离心分离血清,-20℃冻存备用,集中检测。  1.3 方法  1.3.1 试剂 采用中山公司生产的乙肝两对半试剂盒,用ELISA法分别对472例血清进行HBV两对半进行检测并依据检测结果进行分组。分组如下:A:HBsAg(+)、HB

5、eAg(+)、HBcAb(+)(大三阳);B:HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)(小三阳);C:HBsAg(+)、HBcAb(+);D:HBsAb(+);E:HBeAb(+)、HBcAb(+);F:HBsAg(-)、HBsAb(-)、HBeAg(-)、HBeAb(-)、HBcAb(-)。  1.3.2 荧光定量PCR检测HBVDNA含量 采用深圳匹基公司博日荧光定量PCR系统,按照试剂盒说明书操作程序对上述血清标本进行检测。  1.3.2.1 HBVDNA提取 血清100μl加DNA提取液1100μl,13000r/min离心10min→弃上清→再加提取液Ⅱ

6、25μl,振摇10s→100℃10min→13000r/min离心10min,上清液备用。  1.3.2.2 扩增 取上清液2μl,加入盛有扩增反应液38μl(含引物,dNTPs,Taq酶及PCR缓冲液)的PCR反应管中,扩增40个循环,循环参数为37℃5min;95℃1min;60℃30s。  1.3.2.3 使用博日实时荧光PCR定量DNA分析检测仪,并根据纯化HBVDNA建立的直线回归方程,直接作HBVDNA定量分析和数据读取,结果<1.00×103copy/ml为阴性。  2 结果  实时荧光PCR检测结果,见表1。  表1 实时荧光PCR检测结果(略)  3 讨论 

7、 血清HBV标志物(HBVM)的检测给临床诊断乙肝病毒感染提供了较便捷的诊断依据。在临床应用过程中发现由于病情的发展过程的结局的多样性,尤其是肝功正常而体内确实有病毒复制者的治疗中,定量PCR检测HBVDNA为HBV感染及其疗效的判定提供了一项重要指标。诊断乙型肝炎及了解病毒复制状态的检测指标主要包括两部分:病毒DNA的表达物及其抗体应答系统;病毒DNA。ELISA方法一直是临床诊断HBV感染的传统手段,它实际就是检测病毒DNA的表达物及应答系统[1],直接探测PCR过程中荧光

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