石河子大学国家大学生创新性计划项目中期检查表

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1、石河子大学“国家大学生创新性实验计划”项目中期检查表项目名称高抗氧化活性沙枣多酚的筛选及稳定性研究项目编号091075910项目成员李晓燕马晓丽张建军夏吉飞吴春燕指导教师刘红教授成果形式研究报告或论文立项时间2009年11月31日——2010年12月31日项目进展情况：自项目批准以来，该项目组成员按照项目任务书的计划安排，进行了明确的分工，各项工作一直有序进行。一、第一阶段：2009.12—2010.1进一步丰富文献资料，进行系统分析，详细制定项目研究方案。二、第二阶段：2010.2—2010.61.多酚标准曲线的绘制。2、不同生长期沙枣果叶中沙枣多酚含量

2、的测定及消长规律研究。三、第三阶段：2010.6—2010.81、对沙枣多酚对羟自由基能力的研究。2、对D-301大孔树脂进行预处理以及静态吸附实验的研究。研究成果概述:一、多酚标准曲线的绘制1、测定波长的选择取没食子酸溶液和沙枣提取液的稀释液各1.0ml，分别与各显色试剂混合均匀并定容至25ml，室温避光放置，以1.0ml蒸馏水代替样品作空白，在440—860nm波长范围内进行扫描，得到没食子酸和沙枣提取液经显色反应后的吸收光谱，选择测定的最佳波长为765nm。2、显色体系中各试剂的用量　Folin-Ciocalteau试剂与10%Na2CO3比例准确移

3、取1ml没食子酸对照品溶液，加入0.50mlFolin-Ciocalteau试剂，加入不同体积10%Na2CO3溶液，经显色反应后加水定容至25ml，放置反应一段时间后，于分光光度计上测定吸光值。表110%Na2CO3体积（mL）1.002.003.004.005.00吸光度值0.1870.2330.2960.3230.334结果表明，Folin-Ciocalteau试剂与10%Na2CO3比例为1：10。Folin-Ciocalteau试剂用量取1.00ml没食子酸对照品溶液，加入0.50～3.50mlFolin-Ciocalteau试剂，加入相同体积的

4、10%Na2CO3溶液，经显色反应后加水定容至25ml，放置反应一段时间后，测定吸光值。表2Folin-Ciocalteau用量0.501.001.502.002.503.003.50吸光度值0.2720.1860.1850.1860.1920.1770.124当Folin-Ciocalteau试剂用量为0.50ml时，吸光度值最大。3、显色时间将各比色试剂混合均匀后，室温避光放置，每隔30min时间测定其吸光值，确定比色体系显色反应完全所需要的时间。表3显色时间（min）306090120150吸光度值0.4950.5030.5040.5050.505随

5、着时间的增加，吸光度值增加，当反应时间为60min时，吸光度值增加趋势最大，随后保持平稳。因此选择60min作为反应时间。4、多酚标准曲线的绘制准确称取真空干燥（60℃干燥4h）至恒重的没食子酸标准品适量置于100mL棕色容量瓶中，用水溶解并定容至100mL，摇匀，作为对照品溶液。将配制好的没食子酸溶液配成浓度为4.43μg·mL-1、8.86μg·mL-1、17.72μg·mL-1、35.44μg·mL-1、70.88μg·mL-1、88.60μg·mL-1的溶液。分别取上述不同浓度溶液2mL加到25mL容量瓶中，然后依次加入2mL蒸馏水，0.5mL2m

6、ol/L福林－酚试剂，5mL10%Na2CO3溶液，用水定容至25mL。室温下反应1h，在765nm下测定吸光度。由吸光度对浓度进行回归得方程：A=0.0091c-0.014（R=0.9996），曲线在4.43μg·mL-1～88.60μg·mL-1范围内对照品没食子酸的量与吸光度值呈良好的线性关系。表4不同浓度标准溶液的吸光度没食子酸浓度（μg·mL-1）4.438.8617.7235.4470.8888.60吸光度值0.0150.0630.1570.3160.6270.785二、不同生长期沙枣叶中沙枣多酚含量的测定及消长规律研究在前期的研究基础上，确定

7、超声辅助提取沙枣多酚的最佳提取方案:固液比为1:12，溶剂为70%的乙醇溶液，超声法提取3次（温度为25℃），每次20min。表5不同生长期沙枣叶中多酚含量数据表时间/月0.511.522.533.5含量（mg/ml）0.0450.2490.420.6290.7250.7110.705时间/月44.555.566.57含量（mg/ml）0.6790.6160.5870.5720.4210.2820.273由上图可知，沙枣叶中多酚的含量，随生长期的不同而不同，整体趋势为先增大后减小。叶子6月份达到最大值。三、沙枣多酚对羟自由基能力的研究在25ml容量瓶中依次

8、加入1.0mL，7.5mmoL/mL邻二氮菲溶液，5.0mLPBS