细胞周期素依赖性激酶.doc

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1、细胞周期素依赖性激酶作者：张端莲唐吉云陕声国【关键词】皮肤血管瘤；,,细胞周期素依赖性激酶　　摘要：目的：探讨细胞周期素依赖性激酶7(CDK7)蛋白在皮肤血管瘤组织中的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学人皮肤血管瘤组织中增生期、退化期及正常皮肤组织中(CDK7)蛋白的表达。结果：增生期血管瘤内皮细胞(CDK7)的表达水平明显高于退化期及正常皮肤组织，差异有显著性意义（P<0.01）；退化期与正常皮肤组织血管内皮细胞CDK7表达水平差异无显著性意义（P>0.05）。结论：血管瘤的发生、发展与(CDK7)蛋白的表达有着一定的关系。　　关键词：皮肤血管

2、瘤；细胞周期素依赖性激酶7　　血管瘤是婴幼儿常见的一种皮肤肿瘤，是以血管内皮细胞异常增殖、大量血管增生为主要病理学特征的良性血管病变。尽管对血管瘤及相关领域的研究取得许多进展，但其确切的发病机制仍不十分清楚。一般认为，血管瘤主要的特征是毛细血管的内皮细胞增生［1］。周期素和CDK为细胞周期正调节蛋白(positivecellcycleregulatoryproteins),其作用是促进细胞周期的运转，正常哺乳动物细胞周期的调控是通过细胞周期素(cyclins)、cyclin依赖激酶(CDK)、CDK抑制蛋白(CKI)网络来实现的，它们之间的相互作用在很大程度上决

3、定细胞周期的进展。其中CDK分别受到cyclins的正调控和CKI的负调控,CDK活性的异常可能与肿瘤的发生有着密切的关系［2］。本实验采用免疫组织化学方法对血管瘤组织中CDK7的表达进行了研究，为进一步探讨血管瘤发生、发展的确切机制提供理论依据。　　1材料　　11材料来源　　收集武汉大学人民医院病理科2002~2005年皮肤血管瘤存档蜡块50例，其中男性26例，女性24例，年龄2月~67岁，平均32.5岁。血管瘤位于头皮、眼睑、耳部、颈部、胸部、上臂、手部及大腿等部位。患者术前均未做任何辅助性治疗。　　12材料分组　　蜡块切片厚5um,常规HE染色和免疫组织化

4、学SP法检测血管瘤组织中CDK7的表达。按Mulliken［2］分类标准将切片分组，其中增生期血管瘤24例，退化期血管瘤26例。另取瘤组织周围正常皮肤5例作为对照。　　2主要试剂4　　羊抗人CDK7多克隆抗体，通用型SP免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸，以上试剂均购于福建迈新生物科技开发公司。　　3实验方法　　31常规HE染色　　32免疫组织化学SP法检测CDK7相关抗原　　主要步骤：5um组织切片常规脱蜡至水。CDK7采用高压修复抗原。3％过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性，正常羊血清封闭10min以减少非特异性着色。一抗37℃孵

5、育3h后4℃过夜。生物素标记的二抗处理15min,链霉抗生物蛋白过氧化物酶复合物处理15min。DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作阴性对照，人乳腺癌标本作为CDK7阳性对照。　　4免疫组织化学结果判断　　CDK7以胞核出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。　　采用HPIAS2000型图像分析软件对CDK7的表达进行定量分析。每张切片随机选取5个高倍镜视野（×400），测定每个视野下染色的阳性面积率和平均光密度。以每例5个视野的阳性面积率和平均光密度的平均值作为该例的测量值。　　5统计学处理　　用SPSS

6、11.5统计软件对三组样本阳性颗粒的平均光密度和阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验，检验水准α为0.05。　　6结果　　61HE染色　　增生期血管瘤组织中可见大量增生活跃的内皮细胞，内皮细胞核肥大而淡染。退化期血管瘤组织中血管内皮细胞明显减少，形成大量的毛细血管腔，血管间结缔组织增多，内皮细胞核扁平。　　62CDK7的表达　　增生期血管瘤内皮细胞核中有大量棕黄色颗粒，CDK7表达强；退化期和正常皮肤组织中，血管内皮细胞核仅有少量棕黄色颗粒，CDK7表达弱。经单因素方差分析，三组样本CDK7的表达差异有显著性意义（P<0.05）。　　7讨论4　　细

7、胞周期(cellcycle)是指细胞前一次分裂结束开始生长到下一次分裂终了所经历的过程。根据研究,人们把细胞周期分为4个时相：G1期:从有丝分裂完成到DNA复制之前的间歇期；S期:DNA复制期；G2期：从DNA复制完成到有丝分裂开始的间歇期；M期：从有丝分裂开始到结束,即有丝分裂期。细胞周期中的主要突变发生于S期和M期,而G1期和G2期则是为DNA的复制和细胞有丝分裂做准备工作。现有的研究表明在细胞周期运转进程中,存在两个检验点(checkpoints),细胞可能在此两个检验点处发生细胞周期停顿。细胞周期调节蛋白分为周期素依赖激酶(cyclindependent

8、kinase,CDK)及