软骨多糖对乳腺癌细胞CyclinD1及p21周期蛋白表达影响的研究.doc

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1、软骨多糖对乳腺癌细胞CyclinD1及p21周期蛋白表达影响的研究作者：贾永利，张国蓉，刘艳玲，胡延勋，刘安军【摘要】［目的］研究软骨多糖对乳腺癌细胞CyclinD1及p21周期蛋白表达的影响。［方法］选用MCF-7人乳腺癌细胞系进行体外培养，采用MTT法检测细胞增殖作用，流式细胞仪检测细胞周期的变化，免疫荧光染色方法检测细胞周期蛋白CyclinD1及p21蛋白的表达率。［结果］软骨多糖对MCF-7乳腺癌细胞体外生长有明显的抑制作用，且呈时间和剂量依赖性；软骨多糖使MCF-7乳腺癌细胞出现S期阻滞；软骨多糖促进CyclinD1蛋白失

2、表达及p21蛋白过表达。［结论］软骨多糖通过影响MCF-7乳腺癌细胞周期蛋白的表达而诱导细胞凋亡，为抗乳腺癌活性物质。【关键词】乳腺肿瘤ImpactofCartilagePolysaccharideonExpressionofCyclinD1andp21inBreastCancerCellsAbstract:［Purpose］TostudytheeffectofcartilagepolysaccharideonexpressionofCyclinD1andp21inbreastcancercells.［Methods］MCF-7hu

3、manbreastcancercellswasculturedinvitro,cellproliferationeffectwasmeasuredbyMTTassay;cellcyclechangesbyflowcytometry;expressionofCyclinD1andp21proteinbyimmunofluorescentassay.［Results］GrowthofMCF-7cellsinvitrowassignificantlyinhibitedbycartilagepolysaccharidewithatimede

4、pendentanddosedependentmanner.CartilagepolysaccharideinducedcellcycleblockinSphaseandpromotedlowexpressionofCyclinD1andoverexpressionofp21.［Conclusion］Cartilagepolysaccharideplaysanti-breastcancereffectwithinducingapoptosisandchangesofcellcycleinbreastcancercells.Keywo

5、rds:breastneoplasms;celllines;cartilagepolysaccharide;cyclinD1;p21肿瘤的发生与细胞增殖失控、分化障碍及凋亡受阻密切相关[1]，因此与细胞增殖有关的周期蛋白成为研究癌症发生的热点之一。多糖类化合物是有效的抑癌物质，例如报道的鲨鱼软骨抗癌作用[2]。多糖类化合物具有抑制肿瘤生长及提高免疫力的作用，但大多数局限在植物多糖和真菌多糖，动物多糖的研究相对较少。本实验室以猪软骨提取物——软骨多糖与MCF-7人类乳腺癌细胞为模型进行体外培养，通过观察软骨多糖对乳腺癌细胞周期蛋白Cy

6、clin5D1及p21表达的影响，研究软骨多糖的抗肿瘤作用及其抑癌机制。1材料与方法1.1材料1.1.1软骨多糖的制备猪的肋软骨用胶体磨磨碎（100目），用0.1N的HCl脱钙2h，蒸馏水洗至中性后，加入1%Na2CO370℃加热30min，用木瓜蛋白酶（底物:酶=500∶1）水解3h后，DEAE吸附，NaCl洗脱，得到大分子量的软骨多糖。用3%H2O2降解3h，得到小分子的软骨多糖，用乙醇沉淀，干燥。1.1.2药品与仪器人乳腺癌细胞株MCF-7（天津医科大学惠赠），RPMI-1640培养液（Hyclone公司），EDTA-胰蛋白酶

7、（Gibco），青-链霉素（Gibco），其余试剂均为国产分析纯。酶标仪（Bio-Rid），倒置荧光显微镜（Olympus）。1.2方法1.2.1细胞培养MCF-7培养于10％的新鲜小牛血清，100U/mL青-链霉素的RPMI-1640培养液中，置于5%CO2培养箱，恒温37℃培养。每2~3d换液1次，使用胰蛋白酶消化传代。1.2.2细胞增殖抑制实验(MTT法)选用处于对数生长期的MCF-7细胞，用0.05％胰蛋白酶消化，以2×105个/ml接种于96孔板中,每孔100μl。待贴壁后，分别加入终浓度为50、100、200、400μg

8、/ml的多糖，每孔100μl，每组5个复孔。同时设立对照孔和空白孔。培养24h、48h和72h后，加入MTT工作液（0.5mg/ml）100μl，继续培养4h，吸去溶液，以150μlDMSO溶解结晶物，震荡片刻，用酶标仪测定其在570