腹腔镜胃癌根治术后腹腔冲洗液CEA mRNA的 变化和意义 .doc

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1、腹腔镜胃癌根治术后腹腔冲洗液CEAmRNA的变化和意义作者：青廉余佩武王自强罗华星刘伟【摘要】目的探讨腹腔镜胃癌根治术对腹腔脱落癌细胞的影响。方法收集44例行腹腔镜胃癌根治术患者胃癌切除前后腹腔冲洗液，并以RT-PCR方法检测腹腔冲洗液CEAmRNA表达情况。结果腹腔镜胃癌根治术患者CEAmRNA表达胃癌未切除时阳性率为27.3%（12/44），切除后阳性率为36.4%（16/44），两组之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论腹腔镜胃癌根治术不增加腹腔胃癌细胞的脱落。【关键词】胃癌;癌胚抗原;腹腔镜;根治性胃切除【Abstract】Obje

2、ctiveToinvestigatetheeffectoflaparoscopic-assistedradicalgastrectomyongas-triccancercellsinperitoneallavagefluidfrompatients'withgastriccancer.MethodsPeritoneallavagefluidfrom44patientswithgastriccancerwascollectedbeforeandafterlaparoscopic-assistedradicalgas-trectomytodetectca

3、rcinoembryonicantigen（CEA）mRNAexpressionusingRT-PCR.ResultsThepre-，andpostoperativeCEAmRNApositiveratewas27.3%（12/44）and36.4%（16/44），respective-ly，andtherewasnosignificantdifference（P>0.05）.ConclusionsLaparoscopic-assistedradicalgas-trectomydoesn'tincreasetheintraperitonealf

4、reecancercells.【Keywords】gastriccancer;CEAmRNA;laparoscopic;radicalgastrectomy自1987年腹腔镜应用于胆囊切除术以来，由于其微创优点，应用范围逐渐扩展到外科各个领域。腹腔镜胃癌根治术在国内外开展的手术例数均较少，尚处于探索之中。我院自2004年3月开始行腹腔镜胃癌根治术，术后近期效果良好［1-2］。为探讨腹腔镜胃癌根治术是否增加腹腔脱落癌细胞进而增加腹膜微转移，本研究收集胃癌切除前后腹腔冲洗液检测脱落癌细胞，采用高敏感性的聚合酶链反应（PCR）技术，选择CEAmRNA为胃癌

5、细胞的靶RNA，以了解腹腔镜胃癌根治术对胃癌腹膜微转移的影响。现报告如下:1材料与方法1.1研究对象行腹腔镜胃癌根治术患者共44例，平均年龄作者单位:400038重庆，第三军医大学西南医院普通外科通讯作者:余佩武;电话:（023）68754061;E-mail:yupeiwu01@vip.sina.com51岁（30～71岁），术前经腹部CT、电子胃镜、病理检查证实为胃癌。其中低分化腺癌31例，中分化腺癌10例，黏液腺癌1例，高分化腺癌2例。1.2标本采集建立气腹，置入腹腔镜探查，无腹腔种植转移，无广泛淋巴结转移、浸润，无周围脏器侵犯，可以进4行腹腔

6、镜胃癌根治术。术前、术后分别向腹腔内注入无菌生理盐水150ml冲洗，轻搅动后于Douglas抽吸约50～100ml，1800r/min，离心10min后取沉淀。1.3实验方法1.3.1RNA提取腹腔冲洗液离心沉淀RNA提取采用RNA抽提试剂盒（北京博大泰克生物基因技术有限公司），操作步骤按照试剂盒说明书进行。1.3.2RT-PCR上海生工生物工程技术服务有限公司合成引物序列。CEAmRNAPCR引物A:5'-TGTAGCTGTTGCAAATGCTTTAAGGA-AGAAGC-3';B:5'-TCTGGAACTTCTCCTGGT-CTCTCAGCTGG

7、-3'，产物160bp;内对照β-actin引物序列:5'-GCCACATCGCTCAGACAC-3';5'-CATCACGCCACAGTTTCC-3'，产物614bp;按RT-PCR试剂盒（北京博大泰克生物基因技术有限公司）说明，在反应系统中加入总RNA2μg，置于42℃孵育120min，95℃热变性5min。将mRNA逆转录成cDNA。PCR反应条件，按94℃50s→55℃50s→72℃60s循环32次，最后72℃延伸8min。1.3.3结果分析PCR扩增后产物和β-actin扩增后产物经含EB染色剂的2%琼脂糖凝胶电泳，以160bp出现阳性条带

8、为CEAmRNA阳性，同时614bp出现阳性β-actin扩增后产物，为阳性，见图1。图1CEAPCR电泳图