生物制品 第三章生物制品课件

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1、第三章灭活剂、保护剂、与免疫增强剂第一节灭活剂一、灭活与灭活剂（一）灭活：杀死病原微生物，但不影响免疫原性；其次是破坏血清的补体，以免干扰血清学反应结果。灭活剂：灭活微生物的化学试剂。灭活方法：物理灭活：加热、超声波及射线灭活微生物，此方法免疫原性易破坏，现很少使用（血清56°C半小时灭活补体用此方法）。化学灭活：用化学试剂将病原微生物杀死，此方法经常使用。二、常用的灭活剂种类和原理（一）甲醛：是最古老常用的灭活剂，现在我国用的26种灭活疫苗，均以甲醛为灭活剂。性质：甲醛为刺鼻的气体，水溶液叫福尔马林，浓度为36%-40%。10°C以下易聚

2、合成三聚甲醛或多聚甲醛，为白色沉淀。原理：甲醛的醛基起灭活作用，可使蛋白质的氨基→羟甲基胺羧基→亚甲基二醇单酯羟基→羟甲基酚巯基→硫代亚甲基二醇浓度：需氧菌甲醛浓度到0、1%--0、2%.厌氧菌0、4%--0、8%.病毒0、05%--0、4%.原则是浓度低，时间短，温度低可以灭活细菌，尽量减少破坏抗原（通常加入量，以甲醛含量量计算，折合福尔马林浓度）。（二）烷化剂：将烷基引入，形成烷基取代物，使微生物变性死亡。原理：主要破坏病毒的核酸，作用于A：G碱基，引起DNA单链断裂或双链铰连。此类常用于病毒灭活，种类有AEI—N-乙酰乙烯亚胺，加入浓

3、度到0、05%。BEI—二乙烯亚胺，浓度0、02%；EEI—2—乙基乙烯亚胺，GDA—缩水甘油醛。灭活后加硫代硫酸钠可终止灭活，防止抗原损失。保存：AEI，0--4°C一年，--20°C二年；BEI0--4°C保存一个月。（三）苯酚（石碳酸）人类用的第一个消毒药，具有特殊气味的无色结晶，易潮解成水溶液，与光、氧后颜色变紫色。原理：蛋白质变性以及抑制氧化脱氢酶，芽孢和病毒对它抵抗力强。灭活浓度：抑菌作用是0、2—0、5%（血清防腐），杀菌是1%，杀葡萄球菌是3%。消毒常用它的衍生物，来苏儿（甲酚皂）3—5%浓度，特殊气味，覆盖其他气味，也是医

4、院常用的。(JosephLister,1827~1912)首创用石炭酸喷洒手术室和煮沸手术用具以防术后感染，为防腐、消毒，以及无菌操作奠定了基础。（四）结晶紫（龙胆紫），也叫紫药水，碱性染料，也叫甲紫或甲基青莲，化学名，六甲基副玫瑰苯胺。原理：碱性阳离子可结合细菌阴离子羧基；干扰细胞壁粘肽合成；常作用于革兰氏阳性菌。生物制品的应用有猪瘟结晶紫疫苗，鸡白痢染色抗原。（五）β—丙酰内酯良好病毒灭活剂，性状是无色有气味液体，易潮解和高温失效，5°C密封保存好，现主要用于狂犬灭活苗。另还有防治细菌霉菌生长的防腐剂：硫柳汞（乙基汞硫代水杨酸钠），叠氮

5、钠（NaN3）它们使用浓度0、01-0、02%。可防止血清腐败。三、影响灭活作用的因素（一）药物的特异性：酚类不能杀灭真菌和病毒，阳离子的结晶紫，主要作用于G+菌。（二）微生物的种类和特异性：G+菌和G-菌对药物敏感不一样，繁殖体和芽孢对药物敏感也不一样。（三）药物浓度：浓度愈大，灭活越快，抗原也损失大；但是，95%酒精没75%酒精杀灭细菌好。（四）温度：温度与灭活成正比，每升高10度，金属类杀菌作用增加2—5倍。但高温超过40°C，抗原也损失大。（五）时间：灭活时间与温度和浓度成反比，即灭活杀菌长，温度旧低，浓度也低，就可以杀灭细菌。（六

6、）pH：碱性快，酸性慢，酸性环境对抗原保护好。（七）有机物存在：环境的有机物减低灭活的效果，微生物也是有机物。四、灭活疫苗时的注意事项2人参加灭活，注意药品名和量，灭活后标记。37°C灭活一天后，接种适宜培养基—无菌检查。动物试验，灭活苗制成后，注射小白鼠0、2ml，两只，观察3天。使用试验：用户可先注射1-2头，观察1—2天，看有无过敏，应激等反应，证明安全，才全群使用。思考题：什么叫灭活和灭火剂？灭活剂的种类有哪些？影响灭活的因素是什么？灭活的注意事项有哪些？第二节保护剂保护剂也叫稳定剂，是防止微生物在冻干过程中受到破坏。按作用原理分两

7、类：渗透剂：能渗入细胞，使胞内外渗透压平衡，防止慢冻时损伤细胞。有甘油，蔗糖，二甲基亚砜。非渗透剂：防止细胞内外物质交换在速冻时保护细胞。有蛋白质，聚乙烯吡咯酮。按保护剂分子量分类：低分子量保护剂：糖、氨基酸类。高分子量保护剂：脱脂牛奶、明胶。按化学性质分类：复合物：脱脂牛奶，血清。糖类：蔗糖、乳糖。盐类：乳酸钙、谷氨酸钠。醇类：甘油，山梨醇，甘露醇。酸类：柠檬酸，氨基酸。聚合物：葡聚糖，聚乙烯吡咯酮。一、冻干保护剂的组成和作用按组成将保护剂分为营养液，赋形剂，抗氧化剂。营养液：使受损细胞修复：脱脂牛奶，蛋白质，氨基酸，糖类。赋形剂：骨架作

8、用，制品形成网孔结构，易溶解----蔗糖，乳糖。抗氧化剂：保护酶类，防止氧化—VC，VE，硫代硫酸钠。保护剂的作用：防止细胞内水结晶和细胞失去水分。平衡细胞内外渗透压，防止细胞破