RNA干扰Fas基因表达的免疫组化半定量分析.doc

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1、RNA干扰Fas基因表达的免疫组化半定量分析作者：刘明社赵中夫*张国英张芸武延隽【摘要】　　目的：探索图像分析技术在Fas蛋白表达检测中的作用。方法：用ImageProPlus（IPP）软件图像半定量分析技术，判定RNA干扰抑制Fas基因后小鼠肝组织免疫组织化学染色切片和WesternBlot检测的Fas蛋白表达情况。结果：RNA干扰有效抑制了Fas基因的表达，IPP图像分析方法显示，Fas蛋白表达在免疫组织化学染色切片的差异与WesternBlot检测结果一致。结论：ImageProPlus图像分析手段有利于通过半定量的方式判定Fas蛋白表达的变化。【关键词】RNA干

2、扰Fas蛋白免疫组织化学图像分析　　IssueofEffectsofRNAiInhibitedFasExpressionViaSemiQuantitativeAnalysisofAbstractObjective:ItissurveyedtheeffectofimageanalysisindetectingexpressionofFasprotein.Methods：ImageProPlus（IPP）wasusedasthemethodofsemi-quantitativeimageanalysisonimmunohistochemicalslideimageandon

3、WesternBlotspecificproteinstripimage,andevaluatingtheexpressingproteinofFasgeneinhibitedbyRNAi.Results:StatisticalanalysisshowedthatexpressionofFasgeneeffectivelyinhibitedbyRNAi.TheresultofsemiquantitativeimageanalysisonimmunohistochemicalslideimageaccordedwiththeresultofonWesternBlotspe

4、cificproteinstripimage.Conclusion：ImageProPlusisusefulmethodinanalyzingtheimmunohistochemicalimagesofFasproteinexpression.KeywordsRNAinterference;Fasprotein;Immunohistochemical;Imageanalysis　在检测基因表达的研究中，用免疫组织化学染色方法表明特异蛋白表达的细胞定位和染色程度来表明表达量的多少。虽然从图像上看到了基因不同表达的差异，但要进行统计学处理，就应当把表达结果数字化。我们在进行

5、RNA干扰Fas基因表达的研究中，运用ImageProPlus（IPP）软件分析了Fas蛋白表达免疫组化的实验结果，并与WesternBlot方法进行比较。探索用半定量方法分析研究基因差异性表达。1材料和方法41.1RNA干扰LPS诱导的小鼠肝脏Fas基因的表达实验［１］1.2实验动物分组和Fas基因表达检测20只BALB/c鼠随机分为RNA干扰组（RNAi组）、腺病毒通用阴性对照组（HK组）、模型组（M组）和正常对照组（N组）4个组，每组5只［１］。采用免疫组化方法检测肝脏组织Fas和WesternBlot方法检测各组实验组鼠肝脏组织Fas蛋白的表达［１，２］。1.3

6、小鼠肝脏Fas蛋白表达的免疫组化数码图像实验鼠肝脏切片进行Fas蛋白表达的免疫组化染色。在保持显微镜下相同光强度、数码相机关掉自动白平衡等功能、全部用手动设置等条件下，拍摄400×数码照片，每张切片拍摄5个视野的照片。20只鼠肝脏免疫组化数码图像共100幅。选择640×480像素范围进行裁切图像。1.4小鼠肝脏Fas蛋白表达的WesternBlot检测结果数码图像对显色后的PVDF膜进行数码拍摄（拍摄条件同上,保持所有PVDF膜像素一致），每个实验组拍摄5幅图像，共20幅。1.5数码图像的IPP软件分析首先将IPP程序系统的灰度单位转换成光密度单位。免疫组化染色图像的分

7、析，把图像中呈现黄色的区域（Fas蛋白染色）作为AOI（areaofinterest）进行光密度测定分析。选择测量area面积、density（mean）平均光密度和IOD（integratedopticaldensity）累积光密度。WesternBlot检测数码图像，以Fas和β-actin蛋白表达条带作为AOI进行IOD测定。1.6统计分析用SPSS软件对Fas蛋白表达的IOD值进行方差分析和LSD检验。WesternBlot结果的分析，根据Fas蛋白表达的IOD与β-actin蛋白表达的IOD比值作为相对量进行统计学处理。2结果2