结核杆菌培养基的种类及应用.doc

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1、结核杆菌培养基的种类及应用【关键词】结核杆菌　　自从1882年Koch发现结核杆菌以来，为促进结核杆菌生长，缩短培养时间，达到提前分离、鉴定的目的，人们对结核杆菌的营养、生理代谢及人工培养进行了一系列的研究，经过一个多世纪的不懈努力，已经对结核杆菌的生长规律有了比较深入地了解，并且形成了许多成熟的培养方法。尽管现代分子生物学技术在结核病研究中发挥着越来越重要的作用，但是结核杆菌的培养在结核病的诊断、流行病学指标、结核菌的分型鉴定、药敏试验、结核病药物的研究等方面依然有着不可替代的作用。为了能够较系统地了解、有针对性地选择合适、恰当的培养基，本文就国内外较为成熟的培养基种类及应用进行如下综述。　

2、　1按培养基的性状分类培养结核杆菌的培养基，从性状上分主要有固体培养基、液体培养基、半流体培养基、固液双相培养基等类型，这些培养基各有特点。　　1.1固体培养基最常用的是罗氏（Lownstein-Jenson，L-J）培养基，也是最具代表性的一种，其他的还有小川辰次（Tatsujiogawa）鸡蛋培养基和Middlebrook7H10、7H11等琼脂培养基等。在固体培养基中，由于可以直接观察菌落的形态并可做鉴别用，因此常用于临床标本的分离培养、鉴别、保存菌种及对抗结核药物的敏感性测定等方面，缺点是结核菌生长缓慢。　　1.2液体培养基常用的有苏通（Sauton）培养基、Middlebrook7H

3、9等液体培养基。结核杆菌在液体培养基中能够更广泛的接触营养成分，因此在液体中生长相对较快,主要在液体表面生长，搅动时下沉至管底，可获得大量的结核杆菌。主要缺点是：在对临床标本的收集、采样、运输方面有不利的一面；不能根据肉眼观察菌落形态；培养基污染机会多，影响结核杆菌的生长，污染时不易与结核杆菌鉴别，需涂片染色镜检判断结核杆菌是否生长。　　1.3半流体培养基改良苏通半流体琼脂培养基是一种人工综合培养基，基质透明，呈半流体状态，生长的结核杆菌形成白色颗粒状菌落悬浮于培养基中段，便于观察。　　1.4固液双向培养基Septi-CheckAFB双相培养基是国外应用较早的一种培养基［1］，采用BD专利式封

4、闭式固液双相一体化培养基设计。液相为Middlebrook7H9分枝杆菌专用增菌培养基，可迅速繁殖分枝杆菌，固相为3种固体培养基平面：Middlebrook7H11和改良的L6-J培养基用于及时将增菌肉汤内分枝杆菌进行分离纯化以获得单个菌落，巧克力琼脂用于早期发现污染菌，避免时间浪费。由于有液相作为基础，因此结核杆菌生长较快，也是一种非常有效的培养基。国内有用平菇制备的平菇双相培养基［2］是利用平菇浸出液为基础，加小牛血清、琼脂等成分而配制的一种培养基，根据琼脂的量不同制成液相、固相培养基。在国内应用较少，主要特点是成本低，制备简单，适合于基层使用，有一定的研究价值。　　2按成分分类主要分为以

5、鸡卵和琼脂为基础的两种培养基［3］。为了使结核杆菌达到快速生长的目的，可加上血液、椰汁、平菇液等不同营养成分，从而配制出各种不同的培养基。　　2.1以鸡卵为基础的培养基有L-J培养基、Ogawa培养基、丙酮酸钠培养基和丙酮酸钠细胞色素C培养基等。在鸡卵为主的培养基中，鸡卵液是关键成分，在制备培养基时，要充分考虑鸡卵液的新鲜程度以及营养成分是否受到破坏。　　2.1.1L-J培养基是一种经典的培养基［4］，主要成分有天门冬素、KH2PO4、MgSO4・7H2O、枸橼酸镁、甘油、鸡卵液等，需要血清凝固器对培养基进行凝固，以保证培养基中有一定的凝固水，以满足长时间培养的需要。根据成分种类

6、及剂量的不同，又可分为酸性L-J培养基和碱性L-J培养基。将L-J培养基中KH2PO4的量由2.4g增加为14g，就是酸性L-J培养基，而将KH2PO42.4g改为K2HPO43.6g，就是碱性L-J培养基。L-J培养基制备简单，主要用于分枝杆菌初次分离培养、传代培养、菌落观察、保存菌种、药物敏感性测定及菌种鉴定等，而酸性L-J培养基和碱性L-J培养基用于分枝杆菌分离培养时，标本分别用碱和酸处理。结核杆菌在L-J培养基上生长时，培养时间较长，大约在4~8周，因此不利于临床快速检测的需求，但作为其他快速诊断的参照，以及作为结核杆菌诊断的标准有非常重要的意义。　　2.1.2Ogawa培养基成分较少

7、，又少了天门冬素，因此是一种比L-J培养基更为经济的培养基，主要成分有谷氨酸钠、KH2PO4、甘油、鸡卵液等，还可以通过调整KH2PO4的量及谷氨酸钠的量制备成改良培养基（ModifiedOgawa），此培养基的用途与L-J培养基相同，由于价廉，特别适合于发展中国家［5］。　　2.1.3丙酮酸钠培养基是在L-J培养基的基础上加入丙酮酸钠，除去甘油制备而成，主要用于从标本中分离牛型分枝杆菌或作为本菌