主要禽病的实验室检测方法及结果分析

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1、主要禽病的实验室检测方法及结果分析张国中（中国农业大学）2011年4月23日2（一）血清学检测方法1、免疫血清学技术抗原与抗体在体内（外）均可发生特异性结合反应，因为抗体主要来自于血清，在体外进行的抗原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术。一、常用的实验室检测方法3血清学反应的一般特点高度特异性反应可逆性反应二阶段性影响反应的因素4血清学反应的应用抗原抗体的快速检测微生物的鉴定与分析生物活性物质的超微定量抗原抗体在细胞和亚细胞水平定位52、血清学反应类型及常用试验方法反应类型常用试验名称凝集试验直接凝集

2、试验→平板凝集试验（SPA）血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）沉淀试验琼脂免疫扩散试验（AGP）中和试验病毒中和试验（VN）标记抗体技术酶标记技术→酶联免疫吸附试验（ELISA）6（1）平板凝集试验（SPA）基本原理：细菌、红细胞等颗粒状抗原与相应抗血清在电解质存在情况下，产生可见的颗粒凝集现象。主要应用：鸡白痢（SP）支原体（MG/MS）图1平板凝集试验检测结果8（2）血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）基本原理：某些病毒（如NDV）能够凝集特定种类动物的红细胞，此即红细胞凝集现象。这种红细胞凝集现象可以

3、被特异性抗血清所抑制，即红细胞凝集抑制试验。主要应用：新城疫（ND）禽流感（AI）产蛋下降综合症（EDS）鸡传染性支气管炎（IB）图2血凝抑制试验检测结果G.Cattoli（OIE）10（3）琼脂免疫扩散试验（AGP）基本原理：可溶性抗原（毒素、病毒、细菌裂解液）与相应抗体结合,在电解质存在情况下，产生可见的沉淀物。主要应用：鸡马立克氏病病毒（MDV）鸡痘病毒（FPV）图3琼脂扩散试验检测结果1.抗原；2.阳性对照；3-6.待检血清；7.阴性对照12（4）病毒中和试验（VN）基本原理：抗原与相应的抗血清按

4、适当比例混合作用后，可被中和而失去感染实验动物、组织细胞或鸡胚的能力。主要应用：鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的血清分型。图4采用鸡胚接种进行IBV分离空白对照病毒接种图5采用中和试验对疑似IBV分离物进行鉴定与分型空白对照病毒接种病毒+抗血清15（5）酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理：抗原抗体反应的特异性酶促反应的高效性使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面并保持其免疫活性；使抗原（或抗体）与某种酶连接成酶标物，这种酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留酶的活性。16主要应用：多种禽病检测抗体

5、检测最常用ELISA方法：间接法，是利用酶标记的抗抗体（一般为抗鸡IgG）检测已与固相抗原结合的抗体。图6间接ELISA方法测抗体的基本原理示意图固相载体包被抗原待检抗体酶标二抗底物显色18考虑血清学检测的目的血清样品的采集方法采集血清样品的数量血清样品的标记血清样品的贮藏及运输3、血清学检测应注意的问题191、病原分离鉴定（1）定义：指通过人工培养的方法分离出病原体的过程。（二）病原学检测方法20（2）病原分离主要目的进行疾病诊断疾病确诊的黄金方法病原学研究的基础21（3）病原分离方法细菌分离培养：各种

6、培养基病毒分离鉴定：鸡胚、细胞或实验动物接种22（4）进行病毒分离应注意的问题样品采集时间采集样品种类样品贮藏及运输常见接种途径常用鉴定方法232、聚合酶链式反应（PCR）（1）主要目的：通过对特异性基因片段的检测达到检测病原体的目的。（2）优缺点：方便快捷、存在假阳（阴）性图7常规RT-PCR检测结果（电泳图）253、其它病原学检测方法（1）血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验（2）琼脂免疫扩散试验（AGP）（3）酶联免疫吸附试验（ELISA）（4）胶体金试纸条检测（5）动物实验检查261、雏鸡母源抗体检

7、查（1-3日龄）（1）了解原产地的免疫种类了解原产地易发病种类及保护性水平确定需根据当地情况加免的疫苗根据抗体反应追踪是否有过感染二、实验室监测方案的制定27（2）了解母源抗体水平根据母源抗体水平及各种疫病母源抗体半衰期合理确定疫苗首免时间了解雏鸡免疫保护能力，便于疫病诊断282、免疫检查（1）免疫前检查目的是了解免前抗体水平、决定免疫时间和进行免疫效果评价。初免前检查再免前检查29（2）免疫后检查目的是检查免疫效果，评价免疫成功或失败，尽快采取相应措施确保生产安全。通常应选择免疫后14-21天进行。30

8、（3）定期检查目的是规律性检查抗体消长水平以便及时采取补救措施，分析各种免疫之间的相关性，调整免疫程序。31（4）重要节点检查30~50d检查（检查前几次免疫效果）开产前检查（产蛋期及雏鸡保护性抗体需求）36~40W检查（确定抗体水平、适时补免）323、生产发生变动时的检查（1）日常规律性抗体监测做为发病时检查的参考数据做为鸡群抵抗力的依据，指示病因分析方向做为流行病学分析数据，利于发现病原变异33（2）双份血清检测鉴于发病后