盐法提取菠萝蛋白酶的研究

《盐法提取菠萝蛋白酶的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、盐法提取菠萝蛋白酶的研究张桂香王元秀矫强石玉宝济南大学化学化工学院生物技术系济南,250022摘要：论文采用正交实验，运用盐析法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶，对菠萝蛋白酶的提取工艺及其影响因素进行了研究，并对提取后得到的菠萝蛋白酶进行测定。关键词：菠萝皮、菠萝蛋白酶、正交实验、盐析法前言：酶的应用已有几千年的历史。特别是近30来，随着酶生产的不断发展，酶已广泛地用于食品、轻工、医药、环保以及科技等领域。目前已经发现的酶约有3000种，但现在已应用的酶不足十分之一，而已工业化生产和应用的酶不过几十种[1]。菠萝蛋白酶就是其中的一种酶，它存在于菠萝家族之中，它不仅存在于芽中，

2、而且也存在于果实之中。通过压榨芽殖细胞，用丙酮、NaCl或(NH4)2So4使沉淀物凝固的办法可获取菠萝蛋白酶[2]。一般提取用的酶源是凤梨，但是价格较贵，约6000元/吨。而用菠萝皮，不但可以减少资源的浪费，降低费用，又能减少环境的污染。对于菠萝蛋白酶来说，使用盐析法提取是比较理想的一种方法，也使用的最广泛，其基本原理是：不同的蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同而能分离。此法简便、安全[3]。1、材料与设备1.1材料与试剂菠萝皮：市场采集；高岭土、酪蛋白：化学纯pH试纸：山师化工厂；其它试剂均为分析纯1.2仪器与设备电子恒温水浴锅：DZKW-C型，黄骅市卸甲综合电器

3、厂数显温控仪（电热恒温培养箱）：ZJYY-XMT-142，上海跃进医疗器械厂离心机：LG10-2.4A型，北京医用离心机厂高速组织捣碎机：Ds-1，上海标本模型厂制造架盘药物天平：Hc-TP11-1型，上海第二天平仪器厂722光栅分光光度计:上海第三分析仪器厂2、实验方法2.1菠萝蛋白酶的提取方法2.1.1工艺流程[4-5]菠萝皮洗净→去杂→捣碎过滤→[滤液滤渣→乙醇→浸提液→过滤→滤液]→加苯甲酸钠→压出液→10℃加白陶土→吸附物→加(NH4)SO4调pH6.5-7→洗脱液→正交实验方法otherstaffoftheCentre.Duringthewar,Zhuwa

4、stransferredbacktoJiangxi,andDirectorofthenewOfficeinJingdezhen,JiangxiCommitteeSecretary.Startingin1939servedasrecorderoftheWestNorthOrganization,SecretaryoftheSpecialCommitteeAfterthevictoryofthelongMarch,hehasbeentheNorthwestOfficeoftheFederationofStateenterprisesMinister,ShenmufuguS

5、ARmissions,DirectorofNingxiaCountypartyCommitteeSecretaryandrecorderoftheCountypartyCommitteeSecretary,Ministersand3→粗制品→溶解→NaOH调pH→待测液。2.1.2流程说明2.1.2.1滤液制备：选取干净的菠萝皮，除杂，在清水中漂洗三次，沥干，放入冰箱冷冻备用。用高速组织捣碎机打浆，过滤，取滤液，滤渣加入乙醇进行第二次浸提、过滤，合并两次滤液，按汁加0.05%苯甲酸钠作防腐剂，送入冰箱存放备用。2.1.2.2吸附、洗脱：压出汁液置不锈钢保温缸中，不断搅

6、拌，加入汁液量的4%白陶土，在10℃吸附15-20分钟，静置过夜，次晨虹吸除去上清液，留下湿陶土，加入Na2CO3饱和液调节pH6.5-7，再加入按湿土计50%的(NH4)4So4，搅拌25-30分钟，进行洗脱。2.1.2.3待测酶液制备:将上述洗脱液分别离心两次，取沉淀，溶解.按正交试验要求，加入食盐沉淀（盐析），5分钟后，离心，弃上清液，洗涤沉淀，过滤，定容。2.2菠萝蛋白酶测定方法:C.D.U.方法[5]2.3菠萝蛋白酶盐析实验方法:利用L25(56)正交设计表[6]表1正交试验设计表因素水平NaCl添加量（%）（A）溶液pH值（B）沉淀温度(℃)（C）1144

7、02185103226154267205308253、结果与讨论3.1标准曲线测定结果根据标准曲线测定方法，测定三次，取平均值,计算一元线性回归方程为A=0.0091x+0.03736,其中，A:吸光度，x：未消化酪蛋白的量。3.2正交实验结果从菠萝皮中按正交实验提取蛋白酶，并采用测定C.D.U方法分别进行测定，结果如表2。由表2可以看出，影响酶提取的影响因素主次顺序为B>A>C，最优组合为A1B4C1,即：NaCl的量14%，溶液的pH值7，沉淀温度为0℃为最佳。表2正交实验结果实验号因素酶含量ABC111116.093212223.4793133