基因工程的基本操作程序导学案答案

《基因工程的基本操作程序导学案答案》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、1．基因工程的基本操作程序(1)的获取。(2)的构建。(3)将目的基因导入。(4)目的基因的。目的基因的获取目的基因基因表达载体受体细胞检测与鉴定1．2基因工程的基本操作程序2．目的基因的获取(1)目的基因：主要是指的基因，也可以是一些具有的因子。(2)常见方法：①从基因文库中获取基因文库的种类编码蛋白质调控作用基因组文库cDNA文库②利用PCR技术扩增目的基因a．原理：。b．条件：、DNA模板、、四种脱氧核苷酸。c．过程：目的基因DNA受热变性后解链为单链，与单链相应互补序列结合，然后在作用下进行延伸，如此重

2、复循环多次。d．结果：每一次循环后，目的基因的量可以，即成指数形式扩增(约为2n，n为扩增循环的次数)。③人工合成法：如基因比较小，又已知，可借助用化学方法直接人工合成。DNA双链复制引物Taq酶引物DNA聚合酶增加一倍核苷酸序列DNA合成仪[思维激活1]PCR过程中，需要解旋酶吗？所需要的DNA聚合酶应具有什么特点？提示PCR过程中，DNA双链解开是在高温下完成的，不需要解旋酶；由于PCR过程温度较高，所以需要能耐高温的DNA聚合酶。1．提取目的基因方法的比较方法基因文库的构建PCR技术扩增人工合成基因组文库

3、部分基因文库(如cDNA文库)优点操作简单专一性可在短时间内大量扩增目的基因专一性强，可产生自然界中不存在的新基因缺点工作量大、盲目性大、专一性差操作过程较麻烦，技术要求过高需要严格控制温度、技术要求高适用范围小2．PCR技术与DNA复制的比较比较项目DNA复制PCR技术区别解旋方式解旋酶催化DNA在高温下变性解旋场所细胞内(主要在细胞核内)细胞外(主要在PCR扩增仪中)酶解旋酶、DNA聚合酶耐热的DNA聚合酶温度细胞内温和条件控制温度，需90℃～95℃高温结果合成DNA分子合成DNA片段或基因联系(1)模板：

4、均需要脱氧核苷酸双链作为模板(2)原料：均为四种脱氧核苷酸(3)酶：均需DNA聚合酶(4)引物：都需要引物，使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸特别提醒(1)真核细胞的基因编码区含有不能表达的内含子，因此，不能直接用于基因的扩增和表达。获得真核细胞中目的基因时，一般用人工合成的方法。(2)PCR扩增的过程：目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应的互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环多次。由于延伸后得到的产物同样可以和引物结合，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一培

5、，即成指数形式扩增(约为2n，其中n为扩增循环的次数)。【巩固1】下列获取目的基因的方法中需要模板链的是()。①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A．①②③④B．①②③C．①②④D．②③解析PCR利用的是DNA双链复制原理，即将双链DNA之间的氢键打开，变成单链DNA，作为聚合反应的模板。反转录法则是以目的基因转录成的信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下，先反转录形成互补的单链DNA，再合成双链的DNA。①、④则均不需要模板。答案D1．基因表达载

6、体的构建(1)基因表达载体的组成①启动子位置：基因的首端。功能：是识别和结合的部位，驱动基因转录出。基因表达载体的构建与转化RNA聚合酶mRNA②终止子位置：基因的尾端。功能：使在所需要的地方停止下来。③标记基因：鉴别受体细胞中是否含有。(2)基因表达载体的功能使目的基因在受体细胞中，并且可以遗传给下一代，使目的基因能够和发挥作用。(3)基因表达载体的构建一般用同一种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。转录目的基因稳定存在表达2．将目的基因导入受体细胞(1)转化的概念目的基因进入受体细胞内

7、，并且在受体细胞内的过程。(2)将目的基因导入植物细胞①法：将目的基因导入双子叶植物和祼子植物。②法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。③法：我国科学家独创的一种方法。维持稳定和表达农杆菌转化基因枪花粉管通道(3)将目的基因导入动物细胞方法：法。常用受体细胞：。(4)将目的基因导入微生物细胞第一步：首先用Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为细胞。第二步：将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定温度下促进感受态细胞吸收，完成转化过程。显微注射受精

8、卵感受态DNA分子[思维激活2]为什么微生物细胞适合作为基因工程的受体细胞？提示微生物细胞具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少的优点，因此是基因工程常用的受体细胞。1．基因表达载体的构建步骤(1)一般用同一种限制酶切割目的基因和质粒，使其产生相同的末端。(2)将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成一个重组DNA分子(重组质粒)。构建过程(如下图)。2．将