mir―200b抑制人舌癌tca8113细胞生长与侵袭

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1、miR―200b抑制人舌癌Tca8113细胞生长与侵袭　　摘要：目的探讨miR-200b对人舌癌Tca8113细胞的生物学功能。方法运用MTT法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞的生长、迁移和侵袭能力。结果MTT检测发现，过表达miR-200b可抑制人舌癌Tca8113细胞的生长，具有时间依赖性；细胞划痕实验显示，转染miR-200b模拟物48h后伤口愈合率为（56.47±3.18%）与对照组（92.26±2.31%）比能明显减缓Tca8113细胞划痕伤口的愈合，差异有统计学意义（P<0.01

2、）；Transwell侵袭实验显示，转染miR-200b模拟物36h后穿过基底膜的细胞数为（76±5）与对照组（182±11）比能明显减缓Tca8113细胞侵袭能力，差异有统计学意义（P<0.01）。结论miR-200b可抑制人舌癌Tca8113细胞生长与侵袭。　　关键词：miR-200b；舌癌；生长与侵袭　　microRNA是一类长度约为22个核苷酸的非编码RNA小分子，通过与靶基因mRNA的3'UTR区域完全或不完全结合，从而调控相关靶基因的表达[1]。目前miR-200b在肿瘤中的研究如火如荼，在多种恶性肿瘤中，如在胃癌、乳腺癌、胶质瘤以及

3、非小细胞肺癌中表达下调，类似抑癌基因样作用[2-5]。然而目前关于miR-200b在舌癌中的表达情况以及生物学功能尚未见任何文献报道。本研究采用MTT，划痕实验，transwell侵袭实验首次分析miR-200b在人舌癌Tca8113细胞中的生物学功能，为进一步探讨舌癌发生发展的分子机制提供实验依据。　　1实验方法　　1.1MTT法消化培养瓶中预先培养的舌癌Tca8113细胞，收集离心并计数，取200μL即5×103个细胞接种于96孔板中，设复孔6个，置于细胞培养箱中培养24～48h后取出，每孔加入灭菌MTT液（5mg/mL）20μL，培养箱中继

4、续孵育4h。再加入150μLDMSO溶液，低速振荡10min，选择570nm波长，酶标仪测定各孔吸光度值，记录结果，实验重复3次。　　1.2划痕实验将舌癌Tca8113细胞接种于6孔板中培养，待长至临近饱合。用无菌10μLEppendorfTip在细胞板上划痕，于倒置显微镜下分别观察各组细胞0h，24h，48h的划痕距离，并摄像。软件测量各孔细胞任意3个部位的不同划痕距离，并计算各组伤口愈合率，计数三组实验的平均值，并进行统计分析。　　1.3Transwell侵袭实验在8um的transwell小室中铺加50μL基质胶稀释液，放置于37℃培养箱中

5、，过夜以成膜，取100μL即每孔1×105个细胞/mL接种至transwell小室的上腔，另下腔中加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液500μL。置于培养箱中培养36h。取出transwell小室，4%多聚甲醛固定细胞，0.1%结晶?染色。光学显微镜下观察并摄相，随机选取4个视野进行细胞计数，取平均值，实验重复3次。　　1.4统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计学分析。所有结果均以均数±标准差（x±s）表示。两组间比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析，当P<0.05时，为差异有统计学意义。　　2实验结果　　2.1MTT法检测m

6、iR-200b对人舌癌Tca8113细胞生长的影响为确定外源性高表达miR-200b对舌癌Tca8113细胞增殖的作用，将miR-200b模拟物转染于Tca8113细胞中，转染miRNA的无关序列用于阴性对照。转染miR-200b模拟物48h、72h、96h后，舌癌Tca8113细的增殖能力显著抑制，对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。表明高表达miR-200b能明显抑制舌癌Tca8113细胞增殖。　　2.2划痕实验检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞迁移能力影响划痕结果显示，转染miR-200b模拟物48h后伤口愈合率分别为

7、（56.47±3.18%）与对照组（92.26±2.31%）比较明显减缓，差异均有统计学意义（P<0.01）。表明高表达miR-200b能明显抑制舌癌Tca8113细胞的迁移能力。　　2.3Transwell侵袭实验检测miR-200b对人舌癌Tca8113细胞侵袭能力的影响。Transwell结果显示，转染miR-200b模拟物36h后穿过基质胶的细胞数量分别为（76±5），与对照组（182±11）相比，差异具有统计学意义（P<0.01）。表明高表达miR-200b能明显抑制舌癌Tca8113细胞的侵袭能力。　　3讨论　　舌癌是常见的口腔颌面部

8、恶性肿瘤之一，大约占口腔恶性肿瘤的50%～60%左右，全球每年约50万人死于舌癌[6]，严重威胁着人类的生命。近年来，舌癌的发病率不断上