脉络丛内皮细胞培养

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1、1300HumanChoroidPlexusEndothelialCells脉络丛内皮细胞脉络丛细胞在大脑发育，成熟，衰老，内分泌调控和神经变性疾病的发病机理等多方面发挥作用。脉络丛由单层的上皮细胞组成，上皮细胞围绕血管中心共同构成血－脑脊液屏障。脉胳膜毛细血管是单层的被小孔阻隔的内皮细胞，小孔在内腔与胞间隙之间形成隔膜。研究表明，脉胳丛内皮细胞表达大量的Glut1葡萄糖转运蛋白。高密度的葡萄糖转运蛋白保证了脉络膜上皮和内皮细胞具有一定的物质代谢能力，以维持跨血－脑脊液屏障的离子梯度和分泌功能。细胞培养说明注意：冷冻保存的细胞非常脆弱。将小瓶置于37°C水浴，然后尽快移入培养物中，尽量减少

2、操作。经过以下步骤后开始培养细胞1.1.准备纤维连接蛋白包被的培养瓶(2μg/cm2，推荐用T-75的培养瓶)。向培养瓶中加入10ml无菌Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS），再加入150μl纤维连接蛋白原液(1mg/ml,Sigmacat.no.F1141)。将培养瓶放入培养箱中过夜。2.准备完全培养基：用70%的酒精为培养基和添加物的外表面消毒，然后放到无菌的地方。在无菌环境下打开每一个添加物小管并用吸管加入到基本培养基中。用培养基冲洗每一个小管以保证添加物全部加入基本培养基中。3.吸出纤维连接蛋白原液，并向瓶内加入20ml完全培养基。将培养瓶放入超净台中，然后融化细胞。纤维连

3、接蛋白可以使用两次。4.将小瓶放入37°C水浴中，握住并轻轻地旋转小瓶直到完全融化。将小瓶立刻移出水浴，擦干，用70%的酒精冲洗小瓶，然后放到无菌环境中。小心地打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹。用1mleppendorf吸管轻轻重悬管内容物。5.将管中内容物放入均匀的、纤维连接蛋白包被的培养瓶中。推荐接种密度为5,000cells/cm2。注意：细胞融化后不推荐稀释和离心，因为这些操作比培养基中DMSO残留物对细胞的伤害大。内皮细胞接种在纤维连接蛋白包被的培养瓶中能促进细胞帖壁。6.盖好盖子，轻轻地摇晃培养瓶以使细胞分布均匀，如需气体交换则打开瓶盖。7.将培养容器放入培养箱中。8.为了

4、得到良好的结果，在培养开始后至少16个小时内不要动培养物。第二天更换培养基以去除残留的DMSO和未贴壁的细胞，然后每隔一天进行如上操作。培养良好的细胞将呈现卵圆形或纺锤形，非颗粒状细胞质，而不是分散的单个细胞，并且细胞数量在培养2-3天后会加倍。培养的维持1.从冰冻的细胞构建培养物后，第二天早晨更换新鲜的含有添加物的培养基。随后的传代培养中，每隔48小时更换一次培养基。2.每隔一天更换一次培养基，直到细胞有50%融合。3.一旦细胞达到50%融合，则要每天更换培养基直到细胞大约达到90%融合。传代培养：1.细胞达到90%融合时需传代培养。2.在传代培养的前一天准备纤维连接蛋白包被的培养瓶(2

5、μg/cm2)。3.加热培养基，胰酶/EDTA消化液，胰酶中和液和DPBS(磷酸盐缓冲液)到室温。我们不推荐在使用前用37°C水浴加热试剂和培养基。4.用DPBS冲洗细胞。5.用10ml胰酶/EDTA消化液消化细胞(以T-75培养瓶为例)，直到80%细胞呈圆形(在显微镜下观察)，立即加入10ml胰酶中和液并轻轻摇晃培养瓶。注意：（应用ScienCell研究室的胰酶/EDTA消化液能使由于过度消化导致的细胞死亡降到最小程度）6.收取细胞并将其移入50ml离心管中。另外用10ml生长培养基冲洗培养瓶以收集残留的细胞。在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功。剩余细胞数应小于5%。7.以10

6、00转/分（1000rpm）离心收取的细胞悬液5分钟，然后在生长培养基中重悬细胞。8.计数细胞，然后将它们以推荐的细胞密度接种在新的纤维连接蛋白包被过的培养瓶中。注意：处理人类来源的产品存在潜在的风险。尽管每一株细胞都经检测艾滋病毒，乙肝病毒，丙肝病毒呈阴性，检测不能达到100%准确，因此，必须采取适当的保护措施避免无意的暴露。操作这些产品时要带手套和安全镜。不要用嘴吸。我们推荐以下通用的程序来处理人类来源的产品，从而以最小的预防来对抗污染。以上由北京裕恒丰科技有限公司提供http://www.yuhengfengbio.com/