实验九 植物可溶性糖测定

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1、实验九植物可溶性糖测定一、实验目的：学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二、实验原理：植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三、仪器药品：721型分光光度计分析天平研

2、钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。四、操作步骤：1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加酒精（80%)4ml，仔细研磨成均匀的浆状物，倒入10ml刻度离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min,离心10分钟(5

3、000转/min)，收集上清液，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80℃脱色30min,定容至10ml,过滤后取滤液(稀释10倍和20倍后)测定。2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL,放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液

4、，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程试剂（ml)管号1234567葡萄糖标准液00.150.30.450.60.750.980%酒精1.00.850.70.550.40.250.1蒽酮-硫酸试剂5555555葡萄糖浓度(ug/ml)0306090120150a1804.计算样品中含糖量％设V为植物样品稀释后的体积（mL）C为提取液的含糖量(μg/mL)W为植物组织鲜重(g)则得计算式如下

5、：可溶性糖含量％＝(C×V)/(W×106)×100%一、实验结果：标准曲线测得数据：糖浓度0306090120150吸光度值00.1780.3780.5910.750.963做得糖浓度曲线如下：实验样品的吸光值为0.301；从上表可以查得：样品的糖浓度为：47.4ul/ml则：可溶性糖含量％＝(C×V)/(W×10000000)×100%=0.43%分析：蒽酮比色法测糖，实验方法简便，但专一性较差。本次实验中，坐标曲线绘制的较为成功，实验数据全部是原始数据，绘制曲线后发现，曲线较为精确，可使用度较高。实

6、验数据也是原始数据，可信度高。本次实验需要注意的是离心的时候要注意配平，否则会影响实验结果。在计算可溶性糖含量时，注意单位的换算。六、注意事项：1蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心2离心时要平衡3在蒽酮反应前稀释样品10-20倍