猪群监测新方法——唾液检测法

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1、猪群监测新方法——唾液检测法农业部种猪质量监督检验测试中心樊福好前言：血清学检测在猪群免疫监测和疾病诊断中发挥着重大作用，但由于血液采集对技术要求较高，必须具备专用的血清分离设备（如离心机等），且操作程序复杂，况且一旦发生溶血或污染，对检测结果影响较大，人们一直期望有新的检测方法诞生。唾液学方法是其中较有发展前景的方法之一。唾液学方法的优点：唾液学方法中采集的唾液可以直接冷冻，唾液中的各种酶类（如唾液淀粉酶，碱性蛋白酶）和抗菌物质可以使样品保存更长时间。采集唾液的方法简单，所以唾液学方法对机体无任何损伤，不会造成猪只应激，值得推广。另外，唾液中

2、的抗体以分泌型抗体为主，对于免疫功能的解释具有特殊的意义。唾液采集方法：唾液采集的方法简单，利用猪只的好奇心理以及嗜好咀嚼的特性，采用纱布球采集唾液。将纱布制作成纱布球固定于金属线前端，猪只会主动咀嚼纱布球，唾液将通过虹吸现象进入纱布球内。将纱布球内的唾液挤压出，释放至样品袋袋内。将样品袋内的唾液转移至离心管内。图1制作纱布球图2采集唾液图3挤压纱布球、收集唾液图4样品袋内收集的唾液图5离心管内收集的唾液检测方法：采集的唾液必须进行预处理，方可进行抗体或病原等项目的检测。10x104转/分钟，离心1分钟，去除杂质，留取上清。按照常规程序进行EL

3、ISA或PCR检测。结果判定：1、唾液中的病原检测（PCR和RT-PCR）若呈阳性，说明机体正在排毒。2、由于唾液中的抗体和血液中的抗体不是同一个概念，必须避免使用对血清抗体的理解来解释唾液中抗体的作用。血清中的抗体大部分为循环抗体，某些循环抗体的抗病活性较低，只能与抗原起机械结合作用，而分泌型抗体的产生速度是血清循环抗体产生速度的两倍，分泌型抗体除具有机械结合作用外，尚具有对抗原的主动捕捉作用，补体的经典和补充途径激活作用，ADCC作用以及凝集作用。为了便于理解唾液中的抗体作用，可以采用相对抗体（相对量抗体）的概念。相对抗体：指按照同一方法检

4、测出抗体量的相对大小，往往指同一实验室，同一类试剂盒，同一类样品所得出结果的相对大小（百分比表示）。相对抗体的修正参数必须建立在大量检测数据的基础之上，这些数据必须包括完全阴性值，低抗体滴度值，中抗体滴度值和高抗体滴度值，样本以大样本量为宜，标准差至少在30以上。相对抗体的概念解决了不同实验室之间，不同试剂盒之间和不同类型样品之间（如血液与唾液）的测定值的可比性问题，相对抗体值的大小亦不受试剂盒阴阳性对照值大小的影响。而绝对量抗体则不具备此类特性。10份唾液中均检出猪瘟病毒抗体，OD值（阻断ELISA）和相对抗体如下表所示。（表1）编号1234

5、5678910OD值0.0790.2790.550.1020.2630.0860.0950.10.3750.204相对抗体91.048.434.580.149.987.283.080.941.856.610份唾液中均检出环状病毒抗体，OD值和相对抗体如下表所示。（表2）编号12345678910OD值1.5710.790.5680.6290.7210.7320.7470.7571.0190.963相对抗体100.097.882.987.393.494.195.195.7100.0100.010份唾液中均检出猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体，OD值和相

6、对抗体如下表所示。（表3）编号12345678910OD值1.2371.4281.2161.1571.2471.0281.7291.0220.6731.241相对抗体100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.0100.081.2100.0重要说明：唾液中出现分泌型抗体，说明机体近期被病原感染或近期接受弱毒疫苗的免疫接种；分泌型抗体的出现，也同时说明机体具备对某病原的实质性抵抗能力。基因检测发现核酸阳性，说明机体处在感染过程中。