植物细胞实验讲义

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1、配制MS培养基时母液的计算类别成分规定量(mg/L)称取量(g/L)母液体积（mL）扩大倍数配1L培养基取的量（mL）MS大量KNO3190038.0010002050NH4NO3165033.00KH2PO41703.40MgSO4-7H2O3707.40CaCl2-2H2O(CaCl2)4408.80(6.64)类别成分规定量(mg/100ml)称取量(mg/100ml)母液体积（mL）扩大倍数配1L培养基取的量（mL）MS微量MnSO4-4H2O22.3223010010001H3BO36.2620ZnSO4-7H2O8.6860KI0.8383NaMoO4-2H2

2、O0.2525CuSO4-5H2O0.0252.5CoCl2-6H2O0.0252.5MS有机VB10.11010010001VB60.550烟酸0.550甘氨酸2200铁盐FeSO4-7H2O27.82.7850010010Na-EDTA37.33.73分别溶解后加在一起肌醇0.10g/L实验一MS培养基母液及其它试剂的配制与保存一实验目的二实验原理三实验器具和药品四实验内容：1．MS培养基母液的配置2．激素的配制：生长素：NAA，IBA，2,4-D，IAA细胞分裂素：6-BA，KTa)激素配置浓度0.2mg/ml；每种激素配置100mlb)NAA、IBA、IAA一般可

3、先用少量95%酒精助溶，c)2,4-D可用0.1mol／L的NaOH或KOH助溶；d)细胞分裂素类一般先用少量1mol／L盐酸溶解后，再加入温水冷却后定容。3.其它试剂的配置1)灭菌馏水2L2)1mol／LNaOH100ml分装成2份至胶头滴瓶3)1mol／L盐酸50ml至胶头滴瓶4)70%乙醇500ml5)0.1%升汞500ml每组任务分解：第一组：大量无机盐；1mol／LNaOH；2,4-D；第二组：微量无机盐；NAA；70%乙醇第三组：有机物；1mol／L盐酸；6-BA；IAA第四组：铁盐；IBA；0.1%升汞；KT4母液的保存1）装瓶将配置好的母液分别倒入瓶中，母

4、液瓶上贴好标签，注明母液号，配置倍数与配置日期。2）储藏将母液瓶储放在冰箱内备用。注意：1．清洗器皿必须经三道程序：洗涤剂-自来水-蒸馏水。2．所配试剂全部贴上标签，注明试剂名称、浓度、日期。3．锥形瓶瓶口至少用两层牛皮纸扎紧（装有试剂需灭菌时，须两层牛皮纸中间夹层锡箔）4．有螺口的瓶高压灭菌时不能拧得太紧，稍微拧松放入高压锅，灭菌完成后再拧紧瓶口。5．装试剂的细口瓶灭菌时，注意盖瓶塞，包牛皮纸。实验二培养基制备与灭菌一、实验目的学习用母液法配制MS培养基以及掌握高压蒸汽灭菌的一般操作技术。二、实验原理三、材料与用具配制MS培养基的各种母液、植物激素母液、琼脂、蔗糖、蒸馏

5、水、移液管、三角瓶、量筒、定容瓶、电炉或微波炉、酸度计或pH试纸、1mol/L的NaOH、1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔、高压灭菌锅（手提式和全自动），烘箱等。四、实验方法及步骤1.培养基配制每组配制培养基500ml。(1)每组取烧杯一只，分别量取大量元素、微量元素、铁盐、有机物质成分置于烧杯中备用（注意：移液管不能混用）。吸取量＝需要配制培养基的体积*（需要配制浓度/母液浓度）[1]MS+2.0mg/LBA+0.5mg/LNAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8）[2]MS+1.0mg/LBA+0.1mg/LNAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5

6、.8）[1]MS+0.5mg/LBA+0.5mg/LNAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8）[2]MS+2.0mg/LBA+0.5mg/LIAA＋30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8）[3]MS+0.2mg/LBA+1mg/L2,4-D＋2mg/LNAA+30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8）[4]MS+0.1mg/LBA+2mg/L2,4-D+30g/L蔗糖＋8g/L琼脂（pH5.8）每个组各配制1-4号培养基各500ml，此外，第一、二组配制5号培养基，第三、四组配制6号培养各500ml。(2)每组取不锈钢锅一只，量筒取500ml蒸馏水，其中250m

7、l蒸馏水倒入不锈钢锅。称琼脂4g倒入不锈钢锅中，再称蔗糖15g备用。将加入琼脂的不锈钢锅放在电磁炉上煮沸，煮时常用玻璃棒搅动，待琼脂溶化后加入混合液，将装有混合液的烧杯用蒸馏水洗三次，倒入白瓷缸中，并加入蔗糖加热片刻（注意不要煮沸），关闭电磁炉，加蒸馏水定容至500ml。(3)用1MNaOH或1MHCL将pH值调至6.0。调时应用玻璃棒不断搅动，并用pH值试纸测试pH值(4)用玻璃漏斗，将500ml培养基分注于16-18个果酱瓶中，每只约30ml。(5)用盖好瓶盖，写明培养基代号。2.培养基的灭菌l首先，往高压灭菌锅内（外层锅