白血病ly+aml型和my+all型预后因素的临床研究 (40)

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1、慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因在小鼠T淋巴细胞中的表达作者：李振宇作者单位：徐州医学院附属医院血液科，徐州221002【摘要】本研究构建含绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体三质粒系统，并观察其在小鼠T淋巴细胞中的表达情况。应用亚克隆技术将多聚嘌呤通道（PPT）元件、泛醌启动子（PUB）和绿色荧光蛋白基因（GFP）连接至pLO134载体，构建成pTK153载体。之后应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒系统（包括包装质粒△NRF、转移质粒pTK153和包膜蛋白质粒VSVG）共转染293T细胞，12小时后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋

2、白表达情况，72小时收集病毒上清并感染小鼠T淋巴细胞，在荧光显微镜下和应用流式细胞仪（FACS）观察感染情况。结果表明：慢病毒载体的三质粒系统转染293T细胞12小时后在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达，FACS分析转染效率为（63.04±7.24）%，病毒滴度测定为（3.09±0.61）×106U/ml。感染小鼠T淋巴细胞后，荧光显微镜下观察到GFP的表达，FACS分析转导效率为（37.98±6.26）%。结论：成功构建了含绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体，对小鼠T淋巴细胞有较高的感染效率。【关键词】慢病毒载体T淋巴细胞

3、绿色荧光蛋白基因ExpressionofGreenFluorescentProteinGeneinMouseTLymphocytesMediatedbyLentiviralVectorLIZhenYu，XUKaiLin,PANXiuYing,SUNHaiYing,GAOFei,LUQunXian,LIDePeng,HEXuPengDepartmentofHematology，TheAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege，Xuzhou221002，ChinaAbstr

4、actThisstudywaspurposedtoconstructethethreeplasmidsystemofthelentiviralvectorcarryingthegreenfluorescentprotein(GFP)geneandtoinvestigatetheexpressionofGFPinTlymphocytesofthemouse.Thepolypurinetract(PPT)element,ubiquinonepromoter(PUB)andGFPwereligatedtoplasmidpLO

5、134usingsubcloningtechnologytoconstructplasmidpTK153.Humankideny293Tcellswerecotransfectedwiththethreeplasmidsystemcontainingpackagingplasmid△NRF,plasmidpTK153andenvelopeplasmidVSVGbyusingcalciumphosphateDNAprecipationandtheexpressionofGFPwasobservedunderfluor

6、escencemicroscopeafter12hours.Theviralparticleswerecollectedaftertransfection72hours,werefrozenat-80℃andwereusedtoinfectmouseTlymphocytesatmultiplicityofinfection(m.o.i.)of3.TheexpressionofGFPinmouseTlymphocyteswasobservedbyfluorescencemicroscopyandfluorescencea

7、ctivatedcellsorting(FACS).Theresultsshowedthatthetransfectionefficacywas63.04±7.24%in293TcellsanalysedbyFACSandtheviraltiterwas(3.09±0.61)×106U/ml.TheexpressionofGFPwasalsoevidentinmouseTlymphocytesandthetransductionefficacywas(37.98±6.26)%.Itisconcludedthattheth

8、reeplasmidsystemoflentiviralvectorcontainingGFPgeneissuccessfullyconstructedandthetransductionefficacyishighinmouseTlymphocytes.Keywordslentiviralvector;mouse