淀粉酶及其同工酶

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1、淀粉酶及其同工酶1.分类血清淀粉酶同工酶分成S(唾液型)型和P(胰型)。2.关于淀粉酶同工酶的研究除了胰腺、腮腺疾病外还有一些疾病如胆囊炎、小肠梗阻、消化道溃疡穿孔、异位妊娠、恶性肿瘤等也可出现血清淀粉酶活性增高，可能的原因之一就是这些患病组织含有淀粉酶，在炎症时通过各种途径入血引起血清淀粉酶活性增高。但至今国内外对于各种人体组织淀粉酶含量的研究报告甚少。我们收集了部分正常人体组织，经匀浆后测出匀浆上清液中的总淀粉酶(Amy)活性，并用抑制法测定唾液型和胰型淀粉酶同工酶(S-Amy和P-Amy)，从而为探讨临床上血清淀粉酶增高机制提供了实验依据。1　材料　　1.1　仪器　Be

2、ckmanClinicalSystem700型生化分析仪。高速台式离心机，KD-300组织匀浆器。　　1.2　试剂　淀粉酶活性测定采用上海长征公司淀粉酶试剂盒(PNPG4法)。淀粉酶抑制物，为小麦唾液淀粉酶抑制蛋白，由上海长征医院临床酶学研究室纯化和提供［1］。　　1.3　材料和样品采集　意外死亡的正常人3名，2名男性分别为25岁、28岁，1名女性55岁，于死亡后6h内采集样品，取胰腺、腮腺、胃、空肠、回肠、输卵管、子宫、肺、胆囊、骨骼肌和睾丸组织，各取20g左右。　　2　方法　　2.1　组织匀浆液的制备　每种组织重复取样6次，每次取500mg，先用生理盐水清洗，加入pH7.

3、4的0.01mol/LNa2HPO4-NaH2PO4缓冲液2ml后置组织匀浆器中进行匀浆。匀浆器转速为15000r/min，时间为30s×4次。将匀浆液3000r/min离心10min。离心完毕后，吸取上清液进行总淀粉酶和淀粉酶同工酶测定。此步可使95%以上的细胞破碎并释放出淀粉酶［2］。　　2.2　淀粉酶及其同工酶测定［3］。　　2.2.1　测定参数　温度37°C，波长405nm，延迟时间60s，测定时间120s，因数7000。　　2.2.2　淀粉酶总活性测定　50μl生理盐水加10μl匀浆上清液加500μl底物液，按上述测定参数测定，如果总淀粉酶活性＞1000U/L，则用

4、生理盐水稀释后再进行测定。　　2.2.3　胰淀粉酶活性(P-Amy)　50μl抑制剂加10μl匀浆上清液，37°C温育10min，再加入500μl底物液，按上述参数测定，得剩余Amy活性(R-Amy)。结果计算及校正：总Amy(U/L)=7000×ΔA/min。R-Amy(U/L)=7000×抑制后ΔA/min(U/L)。由于该抑制剂对S-Amy的抑制率为97.5%，对P-Amy的交叉抑制率为20%，故P-Amy(U/L)=1.29R-Amy－0.0323×总Amy。S-Amy(U/L)=总Amy－P-Amy。　　3　结果与讨论　　结果见表1与表2。表1　各脏器组织淀粉酶及其

5、同工酶活性(±s)脏　　器总Amy(U/g)P-Amy(U/g)S-Amy(U/g)P-Amy/总Amy(%)胰腺(2.1±0.4)×106(2.1±0.4)×1060100腮腺(6.6±0.6)×1060(6.6±0.6)×1060骨骼肌(6.7±1.9)×10－20(6.7±1.9)×10－20输卵管(2.5±0.7)×1020(2.5±0.7)×1020子宫(1.7±0.5)×1020(1.7±0.5)×1020睾丸(3.7±0.8)×103(3.7±0.8)×1030100空肠(6.3±1.8)×102(5.6±1.4)×102(6.5±1.8)×1089.7±3.2

6、回肠(3.2±0.5)×102(2.4±0.5)×102(7.7±0.8)×1076.0±5.6胃(8.3±1.5)×1020(8.3±1.5)×1020胆囊(4.7±1.2)×102(2.1±0.7)×102(2.6±0.9)×10242.5±8.6肺(2.7±0.9)×1020(2.7±0.9)×1020血清(U/ml)0.086±0.0200.027±0.0650.059±0.01833.0±6.9表2　人组织相对于血清中淀粉酶的活性倍数组　织相对倍数组　织相对倍数胰腺2.5×107腮腺8.2×107胃9.6×103空肠7.3×103胆囊5.5×103回肠3.7×103

7、睾丸4.3×104输卵管3.1×103子宫1.7×103骨骼肌0.78肺3.1×103　　本文测定的11种脏器中，以腮腺、胰腺单位重量内所含淀粉酶活性最高，均达正常人血清中含量107倍以上。曾有人认为血清中淀粉酶几乎来源于这两种脏器，但实际上胃、胆囊、输卵管、子宫、脾、空肠、回肠的淀粉酶含量虽较胰腺、腮腺内的含量少10000倍，但仍达正常人血清淀粉酶含量的1000倍。因此，当这些脏器炎症、损伤时也会引起血清淀粉酶增高，但增高幅度应该与胰腺炎时有较大差别，腮腺、胰腺的炎症引起的血清淀粉酶活性增高要远远超过