树突细胞对免疫活性细胞抑癌效应的非限制性增强作用

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1、树突细胞对免疫活性细胞抑癌效应的非限制性增强作用刘宝瑞钱晓萍邹征云王立峰葛少华南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤科，江苏南京210008[摘要]目的研究抗原负载的树突细胞对免疫活性细胞抑癌的增强作用。方法在建立树突细胞体外扩增的基础上，将抗原负载的树突细胞作用于单个核细胞及高聚金葡素活化的单个核细胞，观察其对人肺癌GLC-82和A549细胞的体外和裸鼠体内抑癌效果。结果抗原负载的树突细胞能显著增强单个核细胞及高聚金葡素活化的单个核细胞对GLC-82和A549细胞的抑制作用，该作用不受主要组织相容性复

2、合物基因（majorhistocompatibilitycomplex,MHC）限制。结论抗原负载的树突细胞对免疫活性细胞的抑癌作用有MHC非限制性增强效果。[关键词]树突细胞/免疫学；肿瘤；免疫细胞；免疫活性[中图分类号]Enhancementofnon-MHCrestrictedanti-tumoreffectofimmunocytesbydendriticcellsLIUBao-rui,QIANXiao-ping,ZHOUZeng-yun,etal.DepartmentofOncology

3、,DrumTowerHospital,Facultyofmedicine,NanjingUniversity,Nanjing210008,ChinaAbstract:ObjectiveTostudytheeffectofantigen-pulseddendriticcellsontumorinhibitioninducedbyimmunocytes.MethodOnthebasesofinvitroexpansionandidentificationofdendriticcells,theant

4、igen-imposeddendriticcellsweremixedwitheithermononuclearcellsorhighlyagglutinativestaphylococcinactivatedmononuclearcells,andtheiranti-tumoreffectswerestudiedinvitroandinvivorespectivelyontheinhibitionofhumanlungcancercelllinesGLC-82andA549.ResultAnt

5、igen-pulseddendriticcellssignificantlyenhancedtheinhibitionofhumanlungcancercelllinesGLC-82andA549inducedbymononuclearcellswithoutMHCrestriction.ConclusionAntigen-pulseddendriticcellsplayaroleinenhanceofanti-tumoreffectofimmunocytesinnon-MHCrestricte

6、dway.Keywords:dendriticcells/immunology;neoplasms;immunity,cellular;immunocompetence[第一作者简介]刘宝瑞（1963-），男，吉林蛟河人，主任医师、教授，南京大学博士生导师，从事肿瘤临床与肿瘤治疗新技术的研究。E-mail:baoruiliu@hotmail.com树突细胞对免疫活性细胞抑癌效应的非限制性增强作用树突细胞（dendriticcell,DC）是已知最强的专职抗原提呈细胞，在抗原摄取、加工、提呈以及诱

7、导特异性免疫应答方面发挥着关键性作用。本文作者在成功地建立树突细胞体外扩增技术并用于肿瘤特异性免疫治疗的同时，意外地发现树突细胞对免疫活性细胞的抗肿瘤效应还具有MHC非限制性增强作用。1．材料与方法1.1主要试剂白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CGF）购自Promega公司，高聚金葡素（HAS）为沈阳协和集团产品，前列腺环素（PGI2）购自Sigma公司。CD1a-FITC、CD83-FITC为Ancell公司产品，HLA-I、II及羊

8、抗鼠-FITC购自北京帮定公司。1.2肿瘤可溶性抗原的提取肺癌GLC-82细胞在含5%小牛血清的RPMI1640培养液中呈对数生长时，收集并离心洗涤细胞，低渗反复冻融4次，5000r/min离心30min，取上清测定蛋白含量，过滤后于-20℃贮存。1.3树突细胞培养与鉴定常规分离健康献血员外周血单个核细胞（PBMC），用含1mmol/LEDTA的PBS洗弃血小板，细胞悬浮于含10%小牛血清的RPMI1640中，以每孔5×106个细胞加入6孔细胞培养板，贴壁2h，再用预温的培养液轻轻洗出非贴壁细胞