杂交中稻广两优476品种与纯度的鉴定

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1、杂交中稻广两优476品种与纯度的鉴定摘要：为辨别杂交中稻广两优４７６种子真伪并鉴定其纯度，利用农业部《水稻品种鉴定dna指纹方法》（ｎｙ／ｔ１４３３—２００７）中推荐的２４对引物进行pcr，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳对广两优４７６及其亲本，以及另外几个育种常用亲本材料进行了多态性筛选，并利用筛选所得引物的ssr标记对广两优４７６进行了种子纯度分析。结果表明，这２４对引物在几个常用亲本及广两优４７６间具有良好的多态性，可用于构建广两优４７６的ｄｎａ指纹图谱。同时，从中筛选得到标记ｒｍ２０９和ｒｍ１７的两对引物在广两优４７６父母本间有显著多态性，其中ｒｍ２０９的引物的

2、pcr产物在２％琼脂糖凝胶电泳条件下分辨效果最好，可用于广两优４７６杂交种子的纯度鉴定。２００９年冬在实验室使用ｒｍ２０９鉴定广两优４７６杂交种子纯度，结果为９８．６％，与２０１０年春在海南田间种植鉴定纯度９８．３％相符。关键词：ｓｓｒ标记；杂交水稻；广两优４７６；品种鉴定；纯度鉴定thevarietyandpurityindentificationofhybridriceguangliangyou476ｄｕｘｕｅ－ｓｈｕ，ｑｉｈｕａ－ｘｉｏｎｇ，ｘｉａｍｉｎｇ－ｙｕａｎ（ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｆｏｏｄｃｒｏｐｓ，ｈｕｂｅｉａｃａｄｅｍｙｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕ

3、ｒａｌｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｗｕｈａｎ４３００６４，ｃｈｉｎａ）ａｂｓｔｒａｃｔ：２４ｓｓｒｍａｒｋｅｒｓｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄｂｙｃｈｉｎａｎａｔｉｏｎａｌｒｉｃｅｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｓｔｉｔｕｔｅｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ；ａｎｄｔｈｅｍａｒｋｅｒｓｓｈｏｗｉｎｇｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｍｏｎｇｈｙｂｒｉｄｒｉｃｅｐａｒｅｎｔｓｏｆｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ４７６ａｎｄｏｔｈｅｒｐｏｐｕｌａｒｃｕｌｔｉｖａｒｓｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｐｕｒｉｔｙｔｅｓｔｏｆｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ４７６ｓｅｅｄｓ．ｉｔｗａｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｓｒｍａｒｋｅｒｓｗｅｒ

4、ｅｗｉｔｈｇｒｅａｔｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｍｏｎｇｔｈｅｐａｒｅｎｔｓａｎｄｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ４７６，ｔｈｕｓｗｅｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｂｕｉｌｄｉｎｇｏｆｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ４７６．２ｓｓｒｍａｒｋｅｒｓ，ｒｍ２０９ａｎｄｒｍ１７，ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｂｅｔｗｅｅｎｒ４７６ａｎｄｇｕａｎｇｚｈａｎ６３ｓ；ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｂａｎｄｓｏｆｒｍ２０９ｗｅｒｅｗｅｌｌｄｅｐａｒｔｅｄｂｙ２％ａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｍａｋｉｎｇｉｔｓ

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6、ａｔｉｏｎ获得高纯度的水稻杂交种子是充分发挥杂交稻杂种优势潜力的基础。由于在制种过程中往往出现生物混杂、机械混杂等，导致杂交种子的纯度和真实性受到影响，因此在水稻杂交种子销售使用前，需对其纯度和真实性进行鉴定［１］。当前鉴定种子纯度的方法主要是田间形态鉴定法，此外还有种子形态鉴定法、幼苗鉴定法、叶色标记鉴定法、同工酶电泳法、蛋白质电泳法以及近年来逐渐开始应用的水稻ｄｎａ指纹图谱鉴定技术等［２］。上述鉴定方法各有利弊。田间形态鉴定法结果较可靠，但存在鉴定周期长、费用高，受季节限制，且鉴定结果是否可靠与鉴定人员经验丰富与否相关；种子形态鉴定法、幼苗鉴定法、叶色标记

7、鉴定法则受限于检测对象是否具备典型的特异性状，适用范围有限；同工酶电泳法、蛋白质电泳法主要的问题是鉴定结果可靠程度不高；而ｄｎａ指纹图谱技术，主要是指利用包括ｒｆｌｐ、ｒａｐｄ、ａｆｌｐ和ｓｓｒ等分子标记技术，鉴定生物个体间是否存在内在的差异［３］，因而鉴定结果可靠，其中ｓｓｒ为共显性标记，具有多态性丰富、简便快捷、稳定性好等特点，且鉴定时间短，费用适中，不受环境影响等，相比较而言更适用于种子真伪和纯度鉴定［４］。广两优４７６是湖北省农业科学院粮食作物研究所以广占６３ｓ为母本，以自主选育的抗白叶枯病和褐飞虱双抗恢复系ｒ４７６为父本选育的高产、优质、多抗两系杂交

8、中稻品种，于２０１０年通过湖北省农作物