[doc] 芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂

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1、芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂第34卷2006年12月分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告ChineseJournalofAnalyticalChemistry第12期1693—1696芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂苑广信何巧红陈恒武方群张燕冰(浙江大学化学系,微分析系统研究

2、所,杭州310028)摘要研究用芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测系统分离测定经7-ehloro-4一nitrobenzo一2?oax?1,3-diazole(NBD.C1)衍生的麻黄碱和伪麻黄碱的实验条件.采用胶束毛细管电动色谱分离体系(12mmol/LSDS+10mmol/L硼砂缓冲液,pH9.0),在45mm长的通道上实现了麻黄碱和伪麻黄碱的快速分离,一次分离小于1.5min.10—100ms/L范围内,峰高与浓度呈良好的线性关系,麻黄碱,伪麻黄碱的检出限分别是O.83mg/L和1.10mg/L.所建立的方法应用于尿中麻黄碱和伪麻黄碱的分离测定,取得满意的结果.关键词麻黄碱,伪

3、麻黄碱,芯片毛细管电泳,激光诱导荧光1引言麻黄碱(ephedrine,EP)和伪麻黄碱(pseudoephedrine,PEP)是一类拟肾上腺素药,具有松弛平滑肌,收缩血管,兴奋中枢神经等作用.在临床上常与消热解痛药一起用于治疗感冒.它们也常被滥用为竞技体育的兴奋剂,已被国际奥委会列为违禁药物….尿样中EP类药物常用GC,HPLC等方法i贝0定,但是分离时间较长.毛细管电泳分离检测EP类药物所需时问较短,但用uV检测I2,31灵敏度较低.Chen等将流动注射在线试样预富集与毛细管电泳联用,使联用系统对EP的检测限达到12mg/L,成功应用于药代动力学研究.最近,Zhang等用荧光

4、试剂7-chloro-4.nitrobenzo.2.OXf1.I,3-diazole(NBD.C1)柱前衍生,毛细管电泳激光诱导荧光法测定了中药中的EP和PEP,提高了检测灵敏度.芯片毛细管电泳与常规毛细管电泳相比,具有分析速度快,仪器易于微型化等优点,适合现场的快速检测.本研究建立了NBDC1衍生,芯片毛细管电泳分离,激光诱导荧光检测尿液中EP和PEP的快速分析方法.2实验部分2.1仪器和试剂GY-6型四路高压电源(东北大学);共聚焦式激光诱导荧光检测系统由半导体激光器(473nm500mW,长春新产业光电有限公司),倒置显微镜,CRll4型光电倍增管等按文献[6]的方法组成,

5、激发和检测波长分别为480和520nm.盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱标准品(中国药品生物制品检定所),NBD?C1和十二烷基磺酸钠(SDS)(Sigma.Aldrich).用水配制EP和PEP标准溶液(300mg/L),用乙腈配制NBD—C1溶液.所用试剂均为分析纯.实验用水为Milipure系统制备的超纯去离子水.2.2实验方法2.2.1芯片的制作十字通道玻璃芯片参照文献[7]的方法制备.分离通道总长45mm(有效长度38mm),进样通道总长10mm,通道顶宽50m,深15m.2.2.2尿样预处理取5mL尿样于20mL离心管,加入2mL乙醚和1g无水NaSO,振荡5min后离心分离

6、.移取上层有机相于2mL离心管,用N:吹干,加100L水溶解残留物.所得溶液按2.2.3节衍生.2.2.3待测物的衍生移取EP和PEP混合标准溶液(或上述溶液)100L于2mL的离心管,加入100L100mmol/L硼砂缓冲液(pH8.4),25mmol/LNBD.C1溶液200L,用水稀释至1mL后,50℃水浴中温浴30min.2.2.4分离测定十字通道依次用0.1mol/LNaOH,水,运行缓冲溶液各冲洗20,l0,20min.在片2006-03—19收稿;2006-08—13接受本文系国家自然科学基金(No.20299030)和科技部863(No.2002AA404240)

7、资助项目第l2期苑广信等:芯片毛细管电泳激光诱导荧光快速分离检测麻黄碱类兴奋剂的影响,结果见图3.当加入7.5mmol/LSDS后(SDS的临界胶束浓度(CMC)为8.75mmol/L),试剂峰II前移至试剂峰I后,但与EP重叠;随着SDS浓度>CMC,分离模式转变为胶束电动色谱后,分离效果逐渐变好.当浓度为12mmol/L时得到很好的分离效果.继续增加SDS浓度分离效果不再改善.故实验选择SDS浓度为12mmol/L.董一?t-.鼍叵鹫皇0E暑E/V图2夹流电压对伪麻黄碱