南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结

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1、一.细胞培养技术的概念,简史在体外对细胞培养并进行研究的技术,也叫细胞克隆技术.细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。细胞培养技术主要包括二大方面内容:1.微生物细胞培养技术2.动,植物细胞培养技术：1)器官培养技术2)组织培养技术3)细胞培养技术二.细胞培养的优点1.得到的是活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动2.可控制：（1）可控制-选择对象：类型：上皮？间质？性质：正常？肿瘤？（2）可控制-调节条件：各种因素:物理、化学、生物等因素（3）可控制-利用方法。采用各种研究技术、记录方法：研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、

2、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记--记录：摄影照片、缩时电影、电视--3.应用广（1）学科多：（2）对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类；一种动物：不同年龄；不同组织:正常或异常（肿瘤）4.较经济：花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象5.不易污染环境三、细胞培养的缺点1.现人工无法完全模拟体内环境：a.失去彼邻关系b.失去神经体液的调节和细胞相互间的影响2.细胞趋向单一化3.失去原有组织结构和细胞形态4.分化减弱或不显：要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。5.

3、某些类型细胞还很难培养6.大规模培养难度大四.体外细胞培养的方式1.粘附型培养:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。粘附是大多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式2.悬浮型培养:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。来源:来自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以.特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团优点:生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态.缺点:观察不方便,很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)五.体外培养细胞的生长形态分类根据形态大致的不同，主要2类：1.上皮样：来源

4、：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡,上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状2.成纤维细胞样：培养中形态与成纤维细胞类似。来源：中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。3.其它，不定型六.常用术语1.细胞系（cellline）：原代培养物首次传代后，就可以称细胞系。不能或有限传代下去称有限细胞系。能连续传代的称连续细胞

5、系。2.细胞株：某类细胞经传代克隆并保持了该类细胞理化特征的细胞群体。3.原代培养：直接取自生物体的组织细胞并进行培养4.传代培养：将细胞从一个培养物内分散到另一个培养物的过程。5.转染（transfection）：将某个基因转移到培养细胞核内。6.lipofection：常用细胞转染剂（脂质体），它搭载基因（DNA）后形成复合物可转染到动物细胞。第二章细胞培养的条件及设备一、细胞培养室二、常用设备1.超净工作台；2.纯水装置；3.抽气泵；4.消毒装置；5.干燥装置；6.CO2培养箱(孵箱)；7.液氮生物容器；8.冰箱；9.离心机10.天平11.显微镜1

6、2.过滤装置13.空调14.酸度计15.干燥器三、常用消耗器材1.培养瓶及各种相关玻璃用品、塑料用品和棉制品2.手术器材四、培养用液1.天然培养基（液）：血清、鸡胚浸出液、鼠尾胶2.人工合成培养液：合成培养基、平衡盐溶液、缓冲液、蒸馏水、消化液和抗菌素等五、消耗性器皿的清洗、包装及消毒第三章细胞培养基本技术一、原代培养基本技术：取材→漂洗→剪切→消化→计数→接种二、传代培养技术：去旧换新液→消化→分装三、细胞冻存及复苏技术培养液高度：2.5~3.0mm第四章每代细胞基本的生长过程一.游离期：细胞接种后最初一段时间,细胞在培养基中呈悬浮状,胞体圆形二.贴壁

7、期：细胞附着于支持物上三.潜伏期：四.指数增长期影响因素1.细胞种类(附着最强)巨噬细胞(30’)一成纤维细胞——上皮细胞——血细胞(最弱)2.生物因素血清、培养液中的促附着因子3.机械，物理等离心：促进附着流动：培养液流动可阻止细胞附着低温：可抑制附着增加细胞粘附的措施（因素）1.增加支持物粘附性a.赖氨酸类b.血清c.某些生物活性物质,纤维性物质d.减少接种时细胞悬液的量待细胞粘附和贴壁之后，再补充足够的培养液e.减少培养液中血清的含量使培养液黏度降低f.培养液中离子成分及其浓度如，培养液中的Ca含量过低时不利于细胞的粘附、贴壁和铺展g.培养液的温度

8、低温会减低细胞的活动，妨碍黏附和贴壁伸展过程细胞悬浮在培养液中时，近似球体形状当