2型腺相关病毒重组绿色荧光蛋白转染体外培养神经干细胞的实验研究的论文

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1、2型腺相关病毒重组绿色荧光蛋白转染体外培养神经干细胞的实验研究的论文2型腺相关病毒重组绿色荧光蛋白转染体外培养神经干细胞的实验研究的论文【摘要】目的探讨2型重组腺相关病毒（rebinantadeno-associatedvirus2,raav-2）载体能否有效地转染nscs。方法采用含有增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,egfp）报告基因的raav-2（raav-2/egfp），以感染复数（multiplicityofinfection,moi）分别为1×10

2、4、1×105、1×106转染体外分离、培养的大鼠胎鼠nscs，在荧光显微镜下观察egfp的表达；同时检测子代细胞的活力、增殖倍数、分化情况来评估对其存活、增殖、分化能力的影响；当egfp表达稳定后，流式细胞仪检测raav-2/egfp对nscs的转染效率。结果转染10天后各转染组便可观察到nscs克隆球发出绿色荧光，起始荧光强度不一，随moi值的增大而增强；各转染组荧光强度随时间的延长而逐渐增强，至转染21天后达高峰并维持，此时流式细胞仪检测raav-2对nscs的转染效率：moi为1×104、1×105、

3、1×106时转染率分别为25.68%、50.60%、54.72%,荧光指数（fi）分别为4.08、12.72、14.06；转染组和未转染组细胞培养7、14、21天时其细胞活力、增殖倍数、分化差异均无显著性。结论raav-2能有效地转染nscs，所介导的目的基因能高效表达。..cOM【关键词】神经干细胞；2型腺相关病毒；转染；感染复数；绿色荧光蛋白；荧光指数；细胞活力【abstract】objectivetoinvestigatethetransfectionefficiencyofrebinantadeno-

4、associatedvirus2（raav-2）inculturedneuralstemcells.methodstheneuralstemcellsofratembryocultured,indentifiedinvitrowasinfectedwiththeraav-2expressingtheenhancedgreenfluorescentprotein（egfp）genebydifferentmultiplicityofinfection（moi=0,1×104,1×105,1×106）.aftert

5、ransfection,theexpressionofegfpwasdetectedbyfluorescentmicroscope.atthesametime,thecytotoxicityofraav-2tonscswasevaluatedbycellproliferation,cellvitalityandcelldifferentiation.thetranfectionefficiencywasevaluatedbyflowcytometer.resultsegfpwasinitiallyexpres

6、sedintheneuralstemcells-drivedneurosphereofalltransfectedgroups10dfollowinginfectedbyraav-2/egfp.thelevelofexpressionincreasedwiththeincreaseofmoi,subsequentlygraduallyincreasedandreachedpeakon21d.transfectionefficiencyandfluorescentindex（fi）were25.68%,4.08

7、（moi=1×104）;50.60%,12.72（moi=1×105）;56.72%,14.06（moi=1×106）respectively.duringtheperiodoftheculture,cellproliferation,cellvitalityandcelldifferentiationinthetransfectedanduntransfectedgrouphadnodifference.conclusionstheraav-2cantransfectneuralstemcellseffic

8、iently,andtheraav-mediatedtransferofthegenecanbeexpressedinthenscs.【keywords】neuralstemcells；rebinantassociatedadenovirus2;transfection;multiplicityofinfection;greenfluorescentprotein;fluorescentindex；