基于纳米粒子放大的生物传感器检测p蛋白

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1、分类号：学校代码：10426密级：学号：2010051009硕士学位论文MASTERDEGREETHESIS基于纳米粒子放大的生物传感器检测p53蛋白作者：王楠楠指导教师：丁彩凤学科专业：应用化学专业代码：081704研究方向：生物分析化学2013年6月1日基于纳米粒子放大的生物传感器检测p53蛋白学位论文完成日期：2013年6月1日指导教师签字：答辩委员会成员签字：青岛科技大学研究生学位论文基于纳米粒子放大的生物传感器检测p53蛋白摘要癌症的死亡率极高，近几年来，是严重威胁人类健康的重大疾病。对肿瘤标志物的准确灵敏的检测，对于肿瘤的诊断、预防、治疗和疗效观察的研究

2、具有重要的作用。其中，p53蛋白是一种重要的肿瘤抑制蛋白，它与细胞凋亡、细胞周期阻滞、细胞衰老、DNA损伤修复、细胞代谢状态改变或发生自噬等重要的生物学功能有关。在高于50%的癌症中，p53基因出现异常，因此，对于p53蛋白的临床检测具有着重要的意义。本论文主要结合了纳米技术，生物条码，滚环复制等技术，得到信号的放大作用，通过石英晶体微天平检测、表面增强拉曼检测等方法实现了对野生型p53蛋白及全部p53蛋白的高灵敏度检测。以下是论文包含的内容：1、研制了一种新颖的基于纳米金粒子质量放大石英晶体微天平（QCM）的频移信号，检测肿瘤标记物p53蛋白的新方法。该方法将抗体

3、先固定在芯片上，对金纳米粒子修饰共识双链DNA，通过抗体与抗原的特异性免疫反应及共识双链DNA对野生型p53蛋白的识别作用，将能放大QCM频移信号的金纳米粒子固定在QCM芯片上，实现对野生型p53蛋白的检测，具有较高的灵敏度和良好的选择性。在最佳实验条件下，对野生型p53蛋白的检测限为0.1pg.mL-1。此方法灵敏度高，选择性好，就有广泛的应用前景。2、研制了一种基于纳米粒子，免疫金及双抗体夹心技术，通过石英晶体微天平（QCM）的频移信号检测p53蛋白的方法。该方法将抗体先固定在芯片上，二抗与金纳米粒子制成免疫金，利用抗体对p53蛋白进行识别，将放大QCM频移的金

4、纳米粒子固定在芯片上，实现对p53蛋白的灵敏检测，其检测限为0.1pg.mL-1。将该方法与上章检测野生型p53蛋白的方法相结合，可以得到野生型p53蛋白同突变型p53蛋白的比例，判断是否是癌细胞，故能为临床医学和生物分析提供了一种新的分析方法。3、报道了一种基于循环信号放大以及生物条码技术，通过表面增强拉曼光谱（SERS）技术来实现对野生型p53蛋白的检测。该方法将拉曼信号分子罗丹明标记的singalDNA和probeDNA修饰到金纳米粒子上，制成生物条码；通过滚环放大将固定在修饰有抗体的聚苯乙烯微球上的primmerDNA复制得到的长链可以接合许多的拉曼信号分子

5、编码的生物条码探针；另外，对金纳米粒子修饰上共识双链DNA；由于抗原抗体特异性免疫反应及共识双链DNA对野生型p53蛋白的识别作用，将它们都固定在纳米金磁微粒上。这样，通过表面增强拉曼光谱（SERS）就可以来完成对野生型p53蛋白的检测。III青岛科技大学研究生学位论文关键词：p53蛋白，金胶纳米粒子，肿瘤细胞，石英晶体微天平，滚环复制，表面增强拉曼光谱III青岛科技大学研究生学位论文ANEWBIOSENSORBASEDONNANOPARTICLESANDAPPLICATIONINASSAYOFP53PROTEINABSTRACTInrecentyears,them

6、ortalityrateofcancer,oneofthemostthreateningdiseasesofthehumanbeing,isbecomingincreasinglyhigh.Theaccurateandsensitivedetectionoftracetumormarkeriscapableofdiagnosingcancer,prevention,treatmentandclinicalobservation.Thereinto,p53,atumorsuppressorproteinandatranscriptionfactor,playsanim

7、portantroleincellgrowthcontrol,DNArepair,andprogrammedcelldeath.Inmorethan50%ofcancercases,thep53genehasbeenfoundtobemutated,therefore,thedetectionofp53proteinistheessentialneed.Thisthesisreportednewmethodsbasedonnanotechnology,biobarcodeandRCA,whichwereusedtodetectwide-typep53andtao