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《控制水稻不定根原基形成的关键基因arli的表达及激素调控》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、控制水稻不定根原基形成的关键基因ARLI的表达及激素调控第三部分在不定根原基起始分化初期,参与原基起始细胞分裂及细胞分裂周期的标记基因表达的LMc半定量分析1.材料与方法1.1材料水稻:粳稻中花一11,arll突变体1.2方法1.2.1材料准备:水稻种子,放于培养皿中,37OC黑暗下浸种至露白(24h),然后转移至湿润滤纸上30/c培养d1:将发芽的种子移至装有自来水(pH5.0)的塑料槽尼龙纱网上,生长条件同本章第一部分"生长3d取稻根茎结合部0.5一1.Ocm,固定"1.2.2LeM(Laser一eaptureMierodissee
2、tion)分析4天苗龄的水稻根茎结合部0.5一,.Ocm:在EAA溶液(酒精;冰醋酸二:31)中4e固定过夜"然后由低浓度到高浓度的乙醇(50%!70%!85%!95%!和100%)逐级脱水!二甲苯透明!浸蜡(用52e低熔点石蜡,sigma一Aldrihc,Gemrna)和包埋T(kagai等.,2004;Shibutnai等.,2000)"样品切成7pm厚,置于HistoGeneLCMslide(Areturus,CA,USA)上,用DEPc水37e展片,烘干的切片用二甲苯脱蜡后(分2次,每次10分钟),立即用Pix一eell11LC
3、MsystemA(crturus,MountainView,CA,USA)进行激光捕获(Kekr等,.2003,Nkaazono等.2003)"用PieopureRNAisolationkit(Aiuturus,CA,USA)从捕获到的细胞中提取胭A"再用Ribogreenreagent(Moleeularprobes,Eugene,OR,USA)分别测定从野生型植株中柱鞘的不定根原基发生区域和非发生区域及arlj突变体相应的区域组织5000个细胞中提取的总RNA浓度"参照几boAmpKit操作说明(1tl切://www.areturu
4、s.eom),每个样品取98.2ng总RNA用形boAmpKit进行逆转录和第一轮扩增"PeR反应条件:94oe,4min;[94oC,45see,61oC:45see,72oC:lSec8x30循环"相关基因的引物序列:O3.SRC(508bP):UPS.ACCGGGCAGAACTCGAATGGCAATCC3.Lows.CGGAGTCGGTGAACGCGGACAACCTC3.QHB(900bP):Ups.ATCCCGGAAGAGACCAAATCAGA3.Lows.TAGGACTAGGCACAGCGACAAGAG3.图3.月几1基因启动
5、子::GUS融合转基因分析Figuer3.ALRIPormoet-rdrivenGUSexPerssioninvaroustissues.FormAtoJ:lemmatiPs(A),lemmavein(B),PdeieelofyoungPnaicle(C),aurical(D),baseofleafbldae(E),vaseularyclindertissueofPrimyarorotnad!aetarloorst(F),orottiP(G)nadvaseulartissueofnahter(H)rachisnadPrim脚acrhis
6、bnarehes穗轴与一级枝梗连接处(I)minorveins(J,横向的小叶脉)FromKto,0cross一seetionsofdaventitious;ootPrimodriaatfi邝tnode(K),seuetllum(L),younglatearlorot(M),vaseulareylinderofseminalorot困)nadlaetarlorotprimodriumof7d一oldseedlings(o)(K图B护Zooum,M和o中b护50um,N,b犷100um)控制水稻不定根原基形成的关键基因ARLI的表达及激素
7、调控2.2参与中柱鞘不定根原基起始细胞分裂的标记基因表达分析图5汤四,以,5.c冲君反彭网万基因在不定根原基起始细胞分裂阶段的表达分析(Wt一P=野生型原基部位,a厂11,二突变体类似原基部位.30cycles)Fi即re5.T一PCRanalysisfortheexpressionsof嵘扮双免6艺万and免六月穷inperieyeleeellsadjaeenttoPeriPheralvaseulareylinderinwildtype(WT)andarllmutantplants图6.几个细胞分裂周期标记基因在不定根原基启动初期的表
8、达比较"(DcNA来源:Wt一=P野生型原基部位:Wt一Pn二野生型非原基部位;arll一书交变体类似原基部位.30eyeles)水稻级公(Z巧艺劫霓一typehomoebox基因)和056艺刀基因都在不定
