蛋白质纯化试题整理

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1、名词解释1.截留分子量(molecularweightcut-off,MWCO)：不能通过膜的最小分子量2.超滤：选择合适孔径的超滤膜，在离心力或较高压力下，使水分子和其他小分子物质通过超滤膜，而目标蛋白样品分子被截留不能通过超滤膜，从而增加蛋白样品浓度，达到浓缩效果的方法3、陶南效应：离子交换剂表面pH与溶液pH是不一致的。在阳IE表面的微环境中，H＋被吸引而OH－被排斥，交换剂表面pH比周围低1个pH单位；而阴IE表面的微环境中，H＋被排斥，交换剂表面pH比周围高1个pH单位4、离子交换剂的有效（实际）交换容量：指在一定的实验条件下，每克干

2、介质或每毫升湿胶吸附蛋白质的实际容量5.聚沉（coagulation）是指在聚沉剂的作用下，溶液中的蛋白质相互聚集为较大在聚沉物（＞1mm）的过程•常见的聚沉剂：无机盐类（如氯化锌、氯化铁、氯化铝、硫酸锌、硫酸铝），聚合无机盐（聚合铝、聚合铁等）•聚沉条件：-20℃以下，pH3~6，较高离子强度，高多价金属离子（Fe3+、Al3+）6.絮凝（flocculation）是指在絮凝剂的作用下，通过吸附、交联、网捕，把蛋白质聚结为大絮体沉降的过程•常见的絮凝剂：淀粉、树脂、单宁、离子交换树脂及纤维素衍生物•絮凝作用一般在聚沉作用之后使用；絮凝剂的选择

3、应根据成本、毒性等具体情况考虑；应通过试验筛选获得最适合的絮凝剂类型、用量及作用条件7、盐溶：蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随着盐浓度的增高而上升8、盐析：但当盐浓度增高到一定数值时，其溶解度又逐渐下降，直至蛋白质析出9、透析：利用小分子能通过，而大分子不能透过半透膜的原理，把不同性质的物质彼此分开的一种方法。对于蛋白质样品，透析过程中因蛋白质分子体积很大，不能透过半透膜，而溶液中的无机盐小分子则能透过半透膜进入水中，因此不断更换透析用水即可将蛋白质与无机盐小分子物质完全分开。蛋白的分离纯化过程中常用此法脱去无机盐（如硫酸铵）10、排阻极限：指不

4、能进入凝胶颗粒内部网孔的最小蛋白的分子量11、凝胶颗粒的分级范围：指能进入凝胶颗粒内部网孔的最大分子和最小分子的分子量范围12、过滤：利用多孔介质（滤纸、滤膜等）阻截大的颗粒物质，而使小于孔隙的物质通过的一种的分离方法。主要用于悬浮液的分离，最简单、最常用13、离子交换剂的电荷密度：指IE介质颗粒单位表面积的功能基团数量，它决定着离子交换剂的总交换容量14、离子交换剂膨胀度（吸水值）：指干态的离子交换剂在水溶液中吸水后造成的体积膨胀程度。用每克干离子交换剂吸水膨胀后的体积表示（ml/g）15、梯度洗脱：进行梯度洗脱时，洗脱缓冲液的pH或离子强度

5、是连续发生变化的，洗脱剂的洗脱能力也是连续增加的16、阶段洗脱：指在一个时间段内用一固定pH或I的条件进行洗脱，而在下一个时间段内用另一固定pH或I的条件进行洗脱的分段式洗脱方式也分为pH阶段洗脱和I阶段洗脱17、亲和层析：利用蛋白质与其专一性配体之间的特异性生物学亲和力作用，对蛋白质进行分离纯化的层析技术。18、等电聚焦电泳：利用不同蛋白质的等电点的不同而使其在pH梯度中相互分离的一种电泳技术。等电聚焦过程中，蛋白质分子在一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳，结果导致每种蛋白质分子迁移到等于其pI的pH处（此时蛋白质分子的净电荷为零），最终聚集

6、形成一个很窄的蛋白区带。19、双向电泳（2-dimensionElectrophoresis，2-DE）是样品经第一向电泳后，再在垂直方向上进行第二向其他类型电泳的电泳方式。目前的双向电泳一般是：第一向为等电聚焦（IEF），第二向为SDS-PAGE20、蛋白质印迹（WesternBlotting）是指把从电泳或层析分离得到的蛋白质转移到固定介质上后，再利用特异性“探针”（抗体）检测固定介质上的特定蛋白质的方法。它能更有效地分析电泳结果21、免疫电泳（immuneelectrophoresis）是基于以及抗原与抗体的特异性免疫沉淀反应而应用的一项

7、电泳技术22、毛细管电泳（CE）：是以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力的一类新型液相分离技术简答1.超滤法浓缩蛋白样品的基本原理？优点？局限性？基本原理：选择合适孔径的超滤膜，在离心力或较高压力下，使水分子和其他小分子物质通过超滤膜，而目标蛋白样品分子被截留不能通过超滤膜，从而增加蛋白样品浓度，达到浓缩效果的方法优点：超滤浓缩技术的优点是操作简便，不需添加任何化学试剂，实验条件温和，而且不引起温度、pH的变化，因而可以防止蛋白质分子的变性、失活。在蛋白质分子的制备技术中，超滤除用于浓缩外，还可用于蛋白样品的脱盐和脱水局限性：不能直接得到

8、蛋白干粉制剂。对于蛋白质溶液，一般最终只能浓缩到10~50％的浓度2.判断已知等电点的蛋白质，在不同PH值溶液中的带电性3.手动加样法的具体操作填装好