dna和rna提取方法及原理 和 提取方法及原理 dna提取专题 dna提取专题第一部分

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1、DNA和RNA提取方法及原理和提取方法及原理DNA提取专题DNA提取专题第一部分液溶液基因组DNA－基因组DNA－其它方法根据细胞裂解方式的不同有：根据细胞裂解方式的不同有：物理方式：玻璃珠法、超声波法、研磨法、物理方式：玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法化学方式：异硫氰酸胍法、化学方式：异硫氰酸胍法、碱裂解法生物方式：生物方式：酶法基因组DNA－基因组DNA－其它方法根据核酸分离纯化方式的不同有：根据核酸分离纯化方式的不同有：吸附材料结合法：吸附材料结合法：???硅质材料高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。高盐低pH值结合核酸，

2、低盐高pH值洗脱。pH值结合核酸pH值洗脱快捷高效。快捷高效。阴离子交换树脂低盐高pH值结合核酸，高盐低pH值洗脱。低盐高pH值结合核酸，高盐低pH值洗脱。pH值结合核酸pH值洗脱适用于纯度要求高的实验。适用于纯度要求高的实验。磁珠磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的物，从而达到分离目的。从而达到分离目的。基因组DNA－基因组DNA－其它方法浓盐法：浓盐法：利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离和在盐溶液中溶解度不同，利用在盐溶液中溶解度不同有机溶剂抽提法：有机溶剂抽提法：有机溶剂作为蛋白变性剂，有机溶剂作为蛋白变性剂，同

3、时抑制核酸酶的降解作用密度梯度离心法：密度梯度离心法：利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物质粒DNA－质粒DNA－碱裂解法碱裂解法原理染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分DNA比质粒DNA分子大得多DNA而质粒DNA为共价闭合环状分子；DNA为共价闭合环状分子子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共DNA溶液时DNA容易发生变性价闭环的质粒DNA在回到

4、中性pH时即恢复其天然构象；DNA在回到中性pH时即恢复其天然构象价闭环的质粒DNA在回到中性pH时即恢复其天然构象；变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉DNA而复性的超螺旋质粒DNADNA分子则以溶解状态存在液相淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相从而可通过离心将两者分开。中，从而可通过离心将两者分开。质粒DNA－质粒DNA－碱裂解法碱裂解法流程图对数期菌体上清液沉淀溶液I充分重悬溶液充分重悬抽提干燥溶解溶液II裂解溶液裂解酒精沉淀质粒DNA溶液溶液

5、质粒溶液III中和溶液中和离心洗涤质粒DNA－质粒DNA－煮沸法煮沸法原理染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为染色体DNA比质粒DNA分子大得多，且染色体DNA为线状分DNA比质粒DNA分子大得多DNA而质粒DNA为共价闭合环状分子；DNA为共价闭合环状分子子，而质粒DNA为共价闭合环状分子；当加热处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，当加热处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共DNA溶液时DNA容易发生变性价闭环的质粒DNA在冷却时即恢复其天然构象；DNA在冷却时即恢复其天然构象价闭环的质粒DN

6、A在冷却时即恢复其天然构象；变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉DNA而复性的超螺旋质粒DNADNA分子则以溶解状态存在液相淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相从而可通过离心将两者分开。中，从而可通过离心将两者分开。细胞器DNA－细胞器DNA－差速离心法线粒体和叶绿体是生物体内半自主性细胞器，线粒体和叶绿体是生物体内半自主性细胞器，自身可编码蛋它们的比重和大小一定比重和大小一定，白，它们的比重和大小一定，因而在同一离心场内的沉降速度也一定，根据这一原理

7、，常用不同转速的离心法，也一定，根据这一原理，常用不同转速的离心法，将细胞内各种组分分级分离出来。种组分分级分离出来。差速离心法原理是利用物质比重的不同分离混合物的一种方法。是利用物质比重的不同分离混合物的一种方法。将待分离物质置于均匀介质（蔗糖）将待分离物质置于均匀介质（蔗糖）中，以一定的转速进行离心，比重大的物质优先沉降，比重小的却处于上层，行离心，比重大的物质优先沉降，比重小的却处于上层，从而得以分离。从而得以分离。内容第一部分：第一部分：DNA提取方法简介提取方法简介第二部分：DNA提取及常见问题分析第二部分：提取及常见问题分

8、析DNA提取的基本步骤DNA提取的基本步骤I.材料准备I.材料准备II.破碎细胞或包膜－II.破碎细胞或包膜－内容物释放破碎细胞或包膜III.核酸分离、III.核酸分离、纯化核酸分离IV.沉淀或吸附核酸，IV.沉淀或吸附