基于大系统理论煤矿综合自动化系统研究

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1、附录二常用的培养基及试剂1、糖发酵管成分：牛肉膏5g磷酸氢二钠2g蛋白胨10g0.2溴麝香草本分蓝深液12ml氯化钠3g蒸馏水1000mlpH7。4制法：（1）葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装有一个倒置小管的小试管内，高压灭菌121℃15min。（2）其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100ml,高压灭菌121℃15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将糖溶液5ml加入100ml培养基内以无菌操作分装小试管。试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，

2、于36±1℃培养，一观观察2-3天，迟缓反应应需观察14-30天。附注：蔗粮不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。2、ONPG增减基成分：邻基粉β-D-半乳糖苷（ONPG）60mg（O-Nitropheny1-β-D-galactopyranoside）0．01%MpH7.5磷酸钠缓冲液10ml1%蛋白胨（pH7.5）30ml制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以滤过法除菌，分装10×75mm试管，每管0.5ml，用橡皮塞塞紧。试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物，满环接种，于36±1℃培养

3、1-3h和24h观察结果。如有β-半乳糖苷酶产生则于1-3h变黄色，如无此酶则24h不变色。3、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）成分：磷酸氢二钾5g葡萄糖5g多胨7g蒸馏水1000ml制法：溶化后校正pH，分装试管每管1ml,高压灭菌121℃15min。甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，放36±1℃培养2-5天，哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：甲基工10mg溶于30ml95%酒精中，然后加入2

4、0ml蒸馏水。V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，放36±1℃培养2-4天。哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。加入6%。A萘酒精溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃4h再进行观察。4、西蒙氏柠檬酸盐培养基成分：氯化钠5G柠檬酸钠5g硫酸镁（MgS047H20）0.2g琼脂20g磷酸二氢铵1g蒸馏水1000ml磷酸氢二钾1g0.2%溴麝香草本分蓝溶液40mlpH6.8制法：先将盐类溶解于内，校正pH再加琼脂

5、，加热溶化然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，高压灭菌121℃15min，放成斜面。试验方法：挑取少量琼脂增物接种，于36±1℃培养4天，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。5、丙二酸钠培养基成分：酵母浸膏1g氯化钠2g磷酸氢二钾0.6g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12ml磷酸二氢钾0.4g蒸馏水1000mlpH6.8制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水,分装每瓶100ml分别加入各种氨基酸。赖氨酸和鸟氨酸按0.5%加入，dl-氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基

6、酸。分装于灭菌的小式管内管每0.5ml，上面滴加一层液体石蜡，高压灭菌115℃10min。试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±℃18-24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使增基变为黄色。对照管应为黄色。9、蛋白胨水（靛基质试验用）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）20g蒸馏水1000ml氯化钠5gpH7.4制法：按上述成分配制，分装小试管，高温灭菌121℃±15min。靛基质试剂：（1）柯凡克试剂将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中然

7、后缓慢加入浓盐酸25ml。（2）殴-波试剂将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95%酒精95ml，然后缓慢加入浓盐酸25ml。试验方法：挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1-2天，必要时可培养4-5天。加入柯凡克试剂0.5ml，轻摇试管，阳性者于试剂层呈红色。或加入殴-波试剂约0.5ml，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。附注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌咱鉴定后方可使用。10、尿素琼脂成分：蛋白胨1g0.4%本分红溶液3ml氯化钠5g琼脂20g葡萄糖

8、1g蒸馏水1000ml磷酸二氢钾2g20%尿素溶液（后加）100mlpH7.2±0.1制法：先将尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶，高压灭菌121℃±15min。冷至50-55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2%，最后pH应为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。11、氰化钾培养基成分：蛋白胨10g