畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范 ny t 1900-2010

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1、畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范NYT1900-2010ICS65.020.30B43NY中华人民共和国农业行业标准NY/T1900-2010畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范Proceduresforcellandembryocryopreservationofdomesticanimals2010-07-08发布2010-09-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T1900-2010前古目本标准遵照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口。本标准起草单位:

2、全国畜牧总站。本标准主要起草人:xiJ丑生、王志刚、赵俊金、史建民、孟飞、于福清、孙飞舟、邱小田。INY/T1900-2010畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范1范围本标准规定了用于保种的家畜精液、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞冷冻保存技术要求。本标准适用于家畜精液、家畜卵母细胞、家畜胚胎和畜禽成纤维细胞等遗传物质冷冻保存和检验人库。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注目期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB4143.牛冷冻精液GB20557山羊冷冻精液

3、NY/T1234牛冷冻精液生产技术规程NY/T1674牛羊胚胎质量检测技术规程3术语及定义下列术语和定义适用于本文件。3.1超低温保存cryopreservation在液氮中冷冻保存遗传物质的技术。3.2卵母细胞oocyte来源于有腔卵泡具有繁殖能力的细胞。3.3成纤维细胞fibroblast以畜禽组织或胎儿为材料，体外培养、分离出的梭形或不规则形细胞。胞质近中央处有椭圆形胞核，胞体→般铺展很开，细胞之间排列疏松，有较大细胞间隙。3.4f共体donor提供精液、卵母细胞、成纤维细胞或胚胎的个体。4细胞冷冻保存4.1家畜精液冷冻保存4.1.1数量每个品种保存

4、精液不少于3000J'fiJ(猪。.5mL细管不少于30000剂).每个品种公畜不少于10头，每个个体保存冻精不少于300剂。4.1.2供体符合其品种特性、特征;三代以内元亲缘关系，系谱清楚;健康、元传染性疾病、遗传疾病;有检疫证NY/T1900-2010明。4.13剂型牛、羊、鹿、犬。25mL细管，马、驴0.5mL细管;猪。.5mL细管或5mL细管。4.1.4标记标明生产单位、品种、供体号和生产日耳目。4.15精液冷冻牛冷冻精液制作应按NY/T1234的规定执行;山羊和绵羊冷冻精液制作按GB20557的规定执行;其他家畜精液冷冻程序参照NY/T

5、l234和GB20557的规定执行;不同家畜精液冷冻稀释液配方见附录B。4.1.6质量检测牛冷冻精液质量检测按GB4143的规定执行;山羊冷冻精液质量检测按GB20557的规定执行;其他家畜冷冻精液的质量检测l按GB4143的规定执行，具体指标要求见附录C，4.2卵母细胞冷冻保存4.2.1数量每个品种保存卵母细胞不少于1000个，牛和绵羊每个品种母畜不少于50头，每个个体保存卵母细胞不少于20个;其他家畜每个品种母畜不少于35头，每个个体保存卵母细胞不少于30个。4.2.2供体供体要求同4.1.2,4.2.3剂型0.25mL细管，每支含卵母细胞不多于10个

6、;OPS玻璃化冷冻每剂不多于5个。4.2.4标记标记要求同4.1.4,4.2.5卵母细胞的采集与冷冻卵母细胞的采集与冷冻参照附录D。4.2.6质量检测j卵母细胞冷冻解冻后达到A级或B级。4.3成纤维细胞冷冻保存4.3.1数量公畜禽不少于10头(只)，母畜禽不少于25头(只)，每个个体体外培养第3~4代细胞6管，细胞密度为1X105个/mL~5X105个/mL，4.3.2供体供体要求同4.1.2,4.3.3剂型2mL冻存管。4.3.4标记标明生产单位、品种、细胞来源、供体号、性别、培养代数、冻存编号和冻存日期。4.3.5成纤维细胞的体外培养和冷冻保存成纤维细

7、胞的体外培养和冷冻保存方法参照附录E。4.3.6质量检ìJ1g台盼蓝染色检查细胞存活力80%以上，生长曲线与冷冻前体外生长曲线相近，核型正常，元病原商和支原体。具体方法参照附录E。NY/T1900-20105胚胎冷冻保存5.1数量每个品种冷冻保存体内胚胎不少于200枚，每个品种公畜不少于10头，母畜不少于25头，每个种公畜配种获得的胚胎数不少于20枚，冻前胚胎质量为A级。5.2供体供体要求同4.1.2。5.3剂型0.25mL细管，每支细管1枚~2枚。5.4标记标明生产单位、品种、公畜号、母畜号、胚胎发育期、冷冻方法、等级、数量和生产时间。5.5胚胎采集和冷

8、冻保存胚胎采集和冷冻保存方法参照附录Fo56质量检测牛、羊冷冻胚胎