制药工程基础实验实验

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1、实验一、培养基的配置与微生物的接种培养实验（一）实验目的：通过实验，使学生了解和掌握培养基的配置、消毒方法和接种与培养技术。了解微生物对营养物质的需求，不同微生物的生长差异。（二）实验原理：微生物必须在含有所需要的营养元素的培养基上才能生长，不同种类的微生物有它所适宜生长的培养基，细菌和真菌的培养基不同，在长期的实践中形成了有些著名的培养基配方和配置方法。微生物的培养过程中要防止其他微生物的存在和生长，因此在接种和培养过程中要进行灭菌和消毒，防止杂菌的干扰。灭菌方式中广泛使用的是蒸汽灭菌，即湿热灭菌。是热灭菌的好处是灭菌效果好，因蛋白质在含水时易变性，另外蒸

2、汽穿透力大，含能量高。使用蒸汽灭菌器要注意排气完全，否则达不到灭菌温度。表1表示排空气程度与实际温度的关系。表1蒸汽灭菌其中空气排除程度与器内温度的关系空气排除程度表压力（kPa）灭菌器内的实际温度（℃）完全排除98.07121排除2/398.07115排除1/398.07112排除1/398.07109完全未排除98.07100蒸汽灭菌器的压力有的以1b/in2（磅/英寸2）、kg/cm2表示，现统一以帕（Pa）或千帕（kPa）表示，它们与温度的关系如表4-2。表2蒸汽压力与温度的关系蒸汽压力相应温度（℃）kPaLb/in2Kg/cm234.4750.35

3、2107.768.95100.703115.5103.42151.055121.6137.90201.406126.6172.37251.756130.5206.84302.109134.4表3糖在不同温度下热灭菌的破坏情况分析方法糖名（10%糖液）灭菌方法103.42kPa(121℃)68.95~82.74kPa(115.6~118℃)55.16~68.95kPa(113~115.6℃)100℃15min20min20min30min含量%破坏%含量%破坏%含量%破坏%含量%破坏%旋光法葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖76.067.994.087.724.032.11

4、6.012.381.885.784.797.718.214.315.32.399.495.386.598.70.61.4.72.13.53.1.392.081.978.896.38.018.121.23.7表4一些微生物杀死的温度与时间微生物热死时间微生物热死时间12温度℃时间min温度℃时间min脆弱假单胞菌氯针假单胞菌荧光假单胞菌赛氏杆菌（低温性）海产弧菌（低温性）鼠伤寒沙门氏菌506053302555351025308010*伤寒沙门氏菌桑夫顿伯格沙门氏菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌结核杆菌产气肠细菌60636061475056*75~303060*指活菌数

5、减少一个对数级即90%被杀死所需的时间。蒸汽灭菌适用范围很广，但主要是培养基的灭菌。在培养基灭菌中最需注意不要过多破坏营养，特别是糖类。糖类在湿热灭菌时破坏情况见表3。（三）实验材料1.大肠杆菌、红豆杉内生真菌。2.生化培养箱。3.超静工作台3.接种环或无菌牙签。4.酒精灯。5.无菌培养皿。6.肉汤培养基牛肉膏0.5g水100ml蛋白胨1.0gPH7.2NaCl0.5g加入1.2％琼脂，即为固体完全培养基（CM）。7.PDA培养基：PDA）：马铃薯煮汁100毫升蔗糖2克琼脂1.5克PH值5.5～6.0    制法：先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片

6、，称20克，加水100毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。然后加琼脂和蔗糖煮溶，后补足水分至100毫升，装培养皿灭菌备用。（四）操作步骤1按上述要求配置2种培养基，分别装入培养皿；2放入高压锅中蒸汽灭菌20min。3待培养基冷却凝固后，在两种培养基上分别接种大肠杆菌和红豆杉内生真菌。37℃培养。42天后检查生长情况。12（五）实验结果与讨论1．如何保证灭菌效果？2不同种类的微生物菌落形态有何差异？3如何为微生物选择合适的培养基？实验二、微生物的显微镜观察（一）实验目的：通过实验使学生了解显微镜的结构和使用方法，了解和掌握微生物的染色技术。（二）实验

7、原理：（三）实验材料1.菌种大肠杆菌，红豆杉内生真菌。2.染色液草酸铵结晶紫染液；蕃红液。3.器具显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸，载玻片。（四）操作步骤1.将固定好的涂片加滴结晶紫1min，若干了，还要补加染料。2.用缓冲流水去染料。3.加蕃红液复染30s。4.用缓冲流水冲去。5.用洗水纸吸干，直接用显微镜观察，先用低倍镜观察，然后用油浸镜观察，作图。（五）染色操作步骤及注意点染色法可以看到染色操作包括制片、固定、染色、媒染、脱色、复染、水洗、干燥等步骤，每一步都具有其操作要点和注意点，若不当心，可能就得不到满意的结果。1.制片制片要采用干净的载波片，并注意

8、接种环的无菌操作。做斜面菌体片时，要防止菌体和水混和