制药工程基础实验实验

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1、实验一、培养基的配置与微生物的接种培养实验（一）实验目的：通过实验，使学生了解和掌握培养基的配置、消毒方法和接种与培养技术。了解微生物对营养物质的需求，不同微生物的生长差异。（二）实验原理：微生物必须在含有所需要的营养元素的培养基上才能生长，不同种类的微生物有它所适宜生长的培养基，细菌和真菌的培养基不同，在长期的实践中形成了有些著名的培养基配方和配置方法。微生物的培养过程中要防止其他微生物的存在和生长，因此在接种和培养过程中要进行灭菌和消毒，防止杂菌的干扰。灭菌方式中广泛使用的是蒸汽灭菌，即湿热灭菌。是热灭菌的好处是灭菌效果好，因

2、蛋白质在含水时易变性，另外蒸汽穿透力大，含能量高。使用蒸汽灭菌器要注意排气完全，否则达不到灭菌温度。表1表示排空气程度与实际温度的关系。表1蒸汽灭菌其中空气排除程度与器内温度的关系空气排除程度表压力（kPa）灭菌器内的实际温度（℃）完全排除98.07121排除2/398.07115排除1/398.07112排除1/398.07109完全未排除98.07100蒸汽灭菌器的压力有的以1b/in2（磅/英寸2）、kg/cm2表示，现统一以帕（Pa）或千帕（kPa）表示，它们与温度的关系如表4-2。表2蒸汽压力与温度的关系蒸汽压力相应温度

3、（℃）kPaLb/in2Kg/cm234.4750.352107.768.95100.703115.5103.42151.055121.6137.90201.406126.6172.37251.756130.5206.84302.109134.4表3糖在不同温度下热灭菌的破坏情况分析方法糖名（10%糖液）灭菌方法103.42kPa(121℃)68.95~82.74kPa(115.6~118℃)55.16~68.95kPa(113~115.6℃)100℃15min20min20min30min含量%破坏%含量%破坏%含量%破坏%含量

4、%破坏%旋光法葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖76.067.994.087.724.032.116.012.381.885.784.797.718.214.315.32.399.495.386.598.70.61.4.72.13.53.1.392.081.978.896.38.018.121.23.7表4一些微生物杀死的温度与时间微生物热死时间微生物热死时间12温度℃时间min温度℃时间min脆弱假单胞菌氯针假单胞菌荧光假单胞菌赛氏杆菌（低温性）海产弧菌（低温性）鼠伤寒沙门氏菌506053302555351025308010*伤寒沙门氏菌桑夫

5、顿伯格沙门氏菌金黄色葡萄球菌大肠杆菌结核杆菌产气肠细菌60636061475056*75~303060*指活菌数减少一个对数级即90%被杀死所需的时间。蒸汽灭菌适用范围很广，但主要是培养基的灭菌。在培养基灭菌中最需注意不要过多破坏营养，特别是糖类。糖类在湿热灭菌时破坏情况见表3。（三）实验材料1.大肠杆菌、红豆杉内生真菌。2.生化培养箱。3.超静工作台3.接种环或无菌牙签。4.酒精灯。5.无菌培养皿。6.肉汤培养基牛肉膏0.5g水100ml蛋白胨1.0gPH7.2NaCl0.5g加入1.2％琼脂，即为固体完全培养基（CM）。7.P

6、DA培养基：PDA）：马铃薯煮汁100毫升蔗糖2克琼脂1.5克PH值5.5～6.0    制法：先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称20克，加水100毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。然后加琼脂和蔗糖煮溶，后补足水分至100毫升，装培养皿灭菌备用。（四）操作步骤1按上述要求配置2种培养基，分别装入培养皿；2放入高压锅中蒸汽灭菌20min。3待培养基冷却凝固后，在两种培养基上分别接种大肠杆菌和红豆杉内生真菌。37℃培养。42天后检查生长情况。12（五）实验结果与讨论1．如何保证灭菌效果？2不同种类的微生物菌落

7、形态有何差异？3如何为微生物选择合适的培养基？实验二、微生物的显微镜观察（一）实验目的：通过实验使学生了解显微镜的结构和使用方法，了解和掌握微生物的染色技术。（二）实验原理：（三）实验材料1.菌种大肠杆菌，红豆杉内生真菌。2.染色液草酸铵结晶紫染液；蕃红液。3.器具显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸，载玻片。（四）操作步骤1.将固定好的涂片加滴结晶紫1min，若干了，还要补加染料。2.用缓冲流水去染料。3.加蕃红液复染30s。4.用缓冲流水冲去。5.用洗水纸吸干，直接用显微镜观察，先用低倍镜观察，然后用油浸镜观察，作图。（五）染色操作

8、步骤及注意点染色法可以看到染色操作包括制片、固定、染色、媒染、脱色、复染、水洗、干燥等步骤，每一步都具有其操作要点和注意点，若不当心，可能就得不到满意的结果。1.制片制片要采用干净的载波片，并注意接种环的无菌操作。做斜面菌体片时，要防止菌体和水混和