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1、宁肠汤对肠易激综合征大鼠抗氧化能力的影响【摘要】目的研究应激法诱导的肠易激综合征(IBS)模型大鼠抗氧化能力变化及宁肠汤对氧自由基的调节作用。方法实验动物随机分为6组：正常组、模型组、阳性对照组及宁肠汤高、中、低剂量组,以慢性束缚＋夹尾刺激作为应激原诱导IBS大鼠模型。正常组、模型组给予生理盐水灌胃,中药组予不同剂量宁肠汤药液灌胃,阳性对照组予匹维溴胺水溶液灌胃,共用药4周。测定大鼠丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性,观察宁肠汤对IBS大鼠抗自由基氧化能力的调节作
2、用。结果慢性束缚＋夹尾刺激诱导的IBS大鼠抗氧化能力降低,血清MDA含量增高,SOD、T-AOC活性降低(P<0.05～0.01)。宁肠汤能降低IBS大鼠血清MDA含量,增高血清SOD、T-AOC活性(P<0.05～0.01)。结论宁肠汤可以提高IBS大鼠的抗氧化能力。【关键词】宁肠汤；应激；肠易激综合征；自由基；大鼠肠易激综合征(irritablebowelsyndrome,IBS)是一组包括腹痛、腹胀、排便习惯和大便性状异常,可持续存在或间歇发作,但又缺乏明显形态学和生化学异常可以解释的证候
3、群,其病因和发病机制目前尚不完全清楚。国内调查研究显示：IBS患者占消化科门诊量的30%～50%,北京地区符合罗马Ⅱ9标准和manning标准的检出率分别是0.82%与7.01%,男女之比约为1︰1.15,多见于18～30岁的青少年[1]。本病虽呈良性经过,但由于发病率高、病情缠绵,严重影响患者的生活质量。目前,自由基的研究已广泛运用于许多疾病的发病及治疗机理研究中,它可以从分子水平反映机体的整体变化。为深入研究调肝健脾中药复方宁肠汤的作用机制,笔者采用慢性束缚＋夹尾刺激作为心理应激原诱导IBS大鼠模型,研
4、究应激对IBS大鼠抗自由基氧化能力的影响及宁肠汤的干预作用。现报道如下。 1材料与方法 1.1动物 同批清洁级雄性SD大鼠70只,体重(200±10)g,浙江中医药大学实验动物中心提供。 1.2药物 宁肠汤组方：柴胡10g,炒白芍15g,钩藤15g,陈皮10g,茯苓15g,白术15g,当归10g,灵芝30g,将中药材用水浸泡,煎煮2次,过滤,浓缩为含有原药材1.5g/mL的药液。阳性对照药为匹维溴胺(法国苏威制药,批号0410),用蒸馏水配制成2mg/mL的混悬液。9 1.3试剂与仪器 超氧化
5、物歧化酶(SOD)试剂盒(批号0606)、丙二醛(MDA)试剂盒(批号0605)、总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒(批号0607)均购自南京建成生物工程研究所。BECKMAN型离心式全自动生化仪(美国实验仪器公司生产制造),722分光光度仪(美国PACKARO公司生产制造)。 1.4造模 参照文献[2-3],以慢性束缚应激＋夹尾刺激法诱导IBS大鼠模型。大鼠每5只同笼,用裹有海绵的夹子夹大鼠尾巴近端1/3处,注意不损伤皮肤,使其激怒,寻衅与其他大鼠撕打,从而激怒全笼大鼠打斗,观察大鼠激怒应激反应(粗叫、
6、站立对峙、扭叫撕咬等),刺激时间持续30min。夹尾刺激结束1h后,大鼠予30%水合氯醛(3mL/kg)麻醉,用纸带束缚前肩、前上肢及胸部,限制其搔抓头面部,但不控制其活动。自大鼠清醒后开始计时,束缚时间为2h。正常组大鼠不予任何刺激。造模时间为14d。 1.5分组及给药9 大鼠适应性喂养1周后,按简单随机化原则,根据体重先分成正常组(20只)和实验组(50只)。造模过程中各组随机取10只大鼠检测小肠运动功能。造模成功后的实验组大鼠再按随机化原则分为模型组、匹维溴胺组和宁肠汤高、中、低剂量组,每组8只。
7、造模结束后第2日起,各组大鼠分别灌胃给药,实验剂量按照试验动物研究“等效剂量”的计算方法[4]。宁肠汤高、中、低剂量组给药量分别为30、15、7.5g/kg·d,匹维溴胺组给药量为15mg/(kg·d),正常组、模型组灌服生理盐水作为安慰对照。各组连续给药14d。 1.6指标测定 1.6.1结肠转运功能 大鼠实验前24h禁食,予30%水合氯醛(3mL/kg)麻醉,取直径为3mm的玻璃小球放入距肛门3cm的直肠内。大鼠苏醒后迅速移至笼内喂食饮水,笼内垫清洁滤纸,观察束缚2h内大鼠排便的粪点数和直肠内玻璃
8、小球排出时间。实验第7、14日及给药结束后第2日分别检测,以验证模型有效性及观察宁肠汤的调节作用。 1.6.2小肠运动功能 大鼠以50%墨汁灌胃(2mL/只),10min后处死。剖取大鼠小肠,分别测量小肠墨汁推进百分率。推进率(%)＝幽门至墨汁前沿的距离/幽门至回盲部的距离×9100%。实验第7、14日,正常组、实验组各随机取5只大鼠检测以验证模型有效性。给药结束后第2日观察宁肠汤的调节作用。 1.6.3结
