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1、宁肠汤对肠易激综合征大鼠抗氧化能力的影响论文.freele,IBS)是一组包括腹痛、腹胀、排便习惯和大便性状异常,可持续存在或间歇发作,但又缺乏明显形态学和生化学异常可以解释的证候群,其病因和发病机制目前尚不完全清楚。国内调查研究显示：IBS患者占消化科门诊量的30%～50%,.freelanning标准的检出率分别是0.82%与7.01%,男女之比约为1︰1.15,多见于18～30岁的青少年1。本病虽呈良性经过,但由于发病率高、病情缠绵,严重影响患者的生活质量。目前,自由基的研究已广泛运用于许多疾病的发病及治疗机理研究中,它可以
2、从分子水平反映机体的整体变化。为深入研究调肝健脾中药复方宁肠汤的作用机制,笔者采用慢性束缚＋夹尾刺激作为心理应激原诱导IBS大鼠模型,研究应激对IBS大鼠抗自由基氧化能力的影响及宁肠汤的干预作用。现报道如下。1材料与方法1.1动物同批清洁级雄性SD大鼠70只,体重(200±10)g,浙江中医药大学实验动物中心提供。1.2药物宁肠汤组方：柴胡10g,炒白芍15g,钩藤15g,陈皮10g,茯苓15g,白术15g,当归10g,灵芝30g,将中药材用水浸泡,煎煮2次,过滤,浓缩为含有原药材1.5g/mL的药液。阳性对照药为匹维溴胺(法国苏
3、威制药,批号0410),用蒸馏水配制成2mg/mL的混悬液。1.3试剂与仪器超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(批号0606)、丙二醛(MDA)试剂盒(批号0605)、总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒(批号0607)均购自南京建成生物工程研究所。BECKMAN型离心式全自动生化仪(美国实验仪器公司生产制造),722分光光度仪(美国PACKARO公司生产制造)。1.4造模参照文献2-3,以慢性束缚应激＋夹尾刺激法诱导IBS大鼠模型。大鼠每5只同笼,用裹有海绵的夹子夹大鼠尾巴近端1/3处,注意不损伤皮肤,使其激怒,寻衅与其他大鼠撕打,从而
4、激怒全笼大鼠打斗,观察大鼠激怒应激反应(粗叫、站立对峙、扭叫撕咬等),刺激时间持续30min。夹尾刺激结束1h后,大鼠予30%水合氯醛(3mL/kg)麻醉,用纸带束缚前肩、前上肢及胸部,限制其搔抓头面部,但不控制其活动。自大鼠清醒后开始计时,束缚时间为2h。正常组大鼠不予任何刺激。造模时间为14d。1.5分组及给药大鼠适应性喂养1周后,按简单随机化原则,根据体重先分成正常组(20只)和实验组(50只)。造模过程中各组随机取10只大鼠检测小肠运动功能。造模成功后的实验组大鼠再按随机化原则分为模型组、匹维溴胺组和宁肠汤高、中、低剂量组
5、,每组8只。造模结束后第2日起,各组大鼠分别灌胃给药,实验剂量按照试验动物研究“等效剂量”的计算方法4。宁肠汤高、中、低剂量组给药量分别为30、15、7.5g/kg·d,匹维溴胺组给药量为15mg/(kg·d),正常组、模型组灌服生理盐水作为安慰对照。各组连续给药14d。1.6指标测定1.6.1结肠转运功能大鼠实验前24h禁食,予30%水合氯醛(3mL/kg)麻醉,取直径为3mm的玻璃小球放入距肛门3cm的直肠内。大鼠苏醒后迅速移至笼内喂食饮水,笼内垫清洁滤纸,观察束缚2h内大鼠排便的粪点数和直肠内玻璃小球排出时间。实验第7、14
6、日及给药结束后第2日分别检测,以验证模型有效性及观察宁肠汤的调节作用。1.6.2小肠运动功能大鼠以50%墨汁灌胃(2mL/只),10min后处死。剖取大鼠小肠,分别测量小肠墨汁推进百分率。推进率(%)＝幽门至墨汁前沿的距离/幽门至回盲部的距离×100%。实验第7、14日,正常组、实验组各随机取5只大鼠检测以验证模型有效性。给药结束后第2日观察宁肠汤的调节作用。1.6.3结肠黏膜病理学观察实验第7、14日,正常组、实验组各随机取5只大鼠,检测小肠运动功能后,剖取乙状结肠0.5cm,10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,HE染色,光学显微镜下
7、观察大鼠结肠黏膜病理组织学改变。1.6.4血清丙二醛含量、超氧化物歧化酶、总抗氧化能力测定给药结束后第2日,各组大鼠摘眼球取血,分离血清。SOD测定采用黄嘌呤氧化酶法,MDA测定采用硫代巴比妥酸法,T-AOC测定采用比色法。1.7统计学方法采用SPSS10.0版统计软件,计量数据以x±s表示,组间差异的比较采用方差分析。2结果(见表1～表5)表1宁肠汤对IBS大鼠结肠转运功能的调节作用(略)注：与正常组比较,*P0.05,**P0.01；与模型组比较,△P0.05,△△P0.01(下同)表2慢性束缚加夹尾刺激对大鼠小肠运动功能的影
8、响(略)表3宁肠汤对IBS大鼠小肠运动功能的调节作用(略)表4IBS大鼠抗氧化能力变化及宁肠汤干预作用(略)表5慢性束缚+夹尾刺激对大鼠结肠转运功能的影响(略)3讨论应激是神经体液调节的一种复杂反应,在人类常常导致胃肠功能失调,表现为胃肠运动、分泌
