房磊-冰冻干燥血小板对创伤修复的治疗作用

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1、冰冻干燥血小板对创伤修复的治疗作用研究生：房磊实验完成人：杜为高峰房磊导师：韩颖研究员军事医学科学院野战输血研究所军事医学科学院野战输血研究所研究背景结论15研究内容2技术路线3实验结果4研究背景---生长因子与创伤修复血小板基因重组生长因子生长因子来源军事医学科学院野战输血研究所合成核酸、蛋白质以及其他细胞外大分子物质趋化巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等细胞增殖成纤维细胞、血管内皮细胞、上皮细胞等修复细胞血小板研究背景---生长因子与创伤修复基因重组细胞因子药物在美国已经开始批准应用并取得良好的临床效果。基因重组药物的缺陷：1单一生长因子作用有限2贝卡普勒明(bec

2、aplermin）效应军事医学科学院野战输血研究所研究背景---血小板与生长因子军事医学科学院野战输血研究所血小板中的生长因子生长因子在创伤修复中的作用更天然更适合血小板创伤修复作用的原理研究背景---血小板与创伤修复军事医学科学院野战输血研究所研究背景---血小板与创伤修复血小板创伤修复作用的应用军事医学科学院野战输血研究所商品化的PRP制备方法研究背景---血小板与创伤修复PRP技术的优缺点PRP中生长因子的含量是静脉血的几十倍PRP中各种生长因子是天然的，并且比例符合体内生理水平PRP中各种生长因子之间存在相互协同作用PRP高效安全难量化难储存PRP在22士2℃条

3、件下振荡保存仅5dPRP中血小板含量因人而异，甚至同一个人在不同时间血小板含量也不同量足军事医学科学院野战输血研究所研究背景---血小板冰冻干燥保存与创伤修复军事医学科学院野战输血研究所冰冻干燥保存：在低温和真空环境中除去血小板保存体系中的自由水和部分结合水，得到粉末状固体，可以长时间贮存，需要使用时进行复水即可。目前研究热点2006200119951956Klein等首次尝试用冷冻干燥的形式长期保存血小板Read等用多聚甲醛固定的方法提高血小板在冻干过程中的渗透稳定性。WoIker等首次使用海藻糖和白蛋白作为冰冻干燥保护剂，在冻干血小板的研究中取得突破性的进展。哈佛大

4、学医学院的一个研究小组首先报道了冰冻干燥血小板创伤修复作用的研究，目前，这一研究正逐渐兴起，但仍处于实验室水平。国内未见相关报道。研究内容冰冻干燥血小板的制备及所含生长因子的研究冰冻干燥血小板促进创伤修复作用的研究:细胞实验动物实验军事医学科学院野战输血研究所一、冰冻干燥血小板制备及所含生长因子分析军事医学科学院野战输血研究所实验结果军事医学科学院野战输血研究所冰冻干燥血小板的制备实验结果采用本实验室自行研制的小分子糖保护法进行冻干血小板的制备保存时间新鲜血小板冻干血小板-20℃保存0d冻干血小板-20℃保存30d冻干血小板-20℃保存90d冻干血小板常温保存20d总蛋

5、白含量62.7±6.7a64.2±9.765.4±6.663.5±6.761.7±10.19080706050403020100冻干血小板-20℃保存0d冻干血小板-20℃保存30d冻干血小板-20℃保存90d冻干血小板常温保存20d新鲜血小板与各冻干组比较aP＞0.05表1血小板提取液总蛋白含量（mg/ml）（means±SD）图1不同保存条件冻干血小板提取液总蛋白含量的测定结果实验结果组别生长因子浓度PDGF-BB(pg/ml)TGF-β1（ng/ml）新鲜血小板503.81±101.13a5.67±1.28b冻干血小板-20℃保存0d497.74±98.545.7

6、4±1.27冻干血小板-20℃保存30d517.26±95.455.57±0.96冻干血小板-20℃保存90d534.17±102.386.04±1.38冻干血小板常温保存20d501.97±98.375.87±1.21与各冻干组比较aP＞0.05；与各冻干组比较bP＞0.05；表2不同保存时间冻干血小板生长因子浓度（n=5，means±SD）实验结果图2血小板中PDGF-BB和TGF-β1二、冰冻干燥血小板促创伤修复作用的研究军事医学科学院野战输血研究所实验结果原代培养的人皮肤成纤维细胞人皮肤成纤维细胞的免疫组化鉴定图3原代培养的人皮肤成纤维细胞（100×）军事医学科

7、学院野战输血研究所1.冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析成纤维细胞是创伤愈合过程中最重要的修复细胞，参与了创伤修复的全过程，其数量及功能变化对创伤愈合有着极大的影响。实验结果1.冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析军事医学科学院野战输血研究所潜伏期对数生长期平台期图4人皮肤成纤维细胞形态观察(100×)图5人皮肤成纤维细胞生长曲线实验结果军事医学科学院野战输血研究所1.冻干血小板生长因子促细胞增殖作用的分析图6MTT法测定人皮肤成纤维细胞的增殖率*******:与rhPDGF-BB治疗组比较P＜0.05实验结果1.冻干血小板生长因子