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1、黄酮提取工艺设计思路1、黄酮类化合物含量测定的原理在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色。黄酮类化合物能与金属离子络合产生有色反应，于波长510nm附近有吸收，可用分光光度法进行测定。实验采用在碱性条件下，亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮形成红色络合物，在波长510nm附近有吸收可进行比色分析。在中性或弱碱性及硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加入氢氧化钠溶液后显红橙色，硝酸钠还原黄酮，加硝酸铝络合，加氢氧化钠使黄酮类化合物开环，生成2’-OH查耳酮而显色。利用黄酮类化合物中的3－羟基、4－羟基、5－羟
2、基、4－羰基或邻二位酚羟基，与Al3＋进行络合反应，在碱性条件下生成红色络合物的原理测定其含量2、测定波长的确定取样品溶液和标准溶液2mL，加70%的乙醇至5mL,然后加入5%的NaNO2溶液1mL,室温放置6min,再加入10%的Al(NO3)31mL,混匀,室温放置6min,加入4%的NaOH10mL,用水稀释至25mL,混匀,放置15min,在分光光度计上扫描波长从400nm～600nm之间的吸收度,结果在510nm波长处有最大吸收值。配合物在Kmax1=354nm及Kmax2=510nm有两个吸收峰,经实验后得出Kmax1=354nm波长处得到的工作曲线线性
3、关系及精密度数据均不佳,故本实验选取Kmax2=510nm为测定波长。3、标准溶液的配制精确称取105℃干燥恒重芦丁对照品50mg,加乙醇适量,使之充分溶解,用乙醇定容到100mL,摇匀,制得芦丁溶液。精确量取芦丁溶液20mL,置于50mL容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。每1mL溶液含芦丁对照品0.2mg。或精密称取干燥至恒重的芦丁标准品10mg,置50mL容量瓶中,加无水乙醇20mL,轻摇使充分溶解,定容,摇匀,得0.2mg/mL芦丁标准液。精确称取芦丁标准品5mg，用70%乙醇溶解，于50mL容量瓶中定容，即得每1mL溶液含芦丁对照品0.1mg芦
4、丁标准品溶液。称取约20mg芦丁标准品于称量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重,干燥器中冷却，精确称取10mg芦丁标准品，用70%乙醇定容至100ml为标准液。4、样品溶液的测定方法4.1、标准曲线的绘制精确量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,分别置于25mL容量瓶中。分别加水至6mL,加5%亚硝酸钠溶液1.0mL,混匀,放置6min;加10%硝酸铝溶液1.0mL,摇匀,放置6min;加1%氢氧化钠溶液10.0mL,再加水至刻度,摇匀,放置15min。用分光光度法在510nm波长处分别测定其吸光度。以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,用
5、最小二乘法对直线进行回归计算，令回归方程为：y=ax+b，绘制标准曲线,得回归线方程:Y=11.32143X+0.00343(r=0.9998),在8~40μg/mL的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。 分别取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL的0.1mg/mL芦丁标准溶液于6支比色管中，分别加入0.3mL5%亚硝酸钠，放置6min，加0.3mL10%硝酸铝后放置6min,，再加1.0mol/LNaOH4.0mL，加70%乙醇定容至10mL，摇匀，放置12min得测定液。以空白溶液作参比,在λ=510nm处测吸光度,计算标准液浓度(C)与吸光度(
6、D)的回归方程D=bC+k。精确吸取芦丁标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置于6支具塞试管中，各补70%乙醇至5.0ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml,，摇匀，放置6min后，加10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀，放置6min后，再加4%氢氧化钠溶液4.0ml，加水0.4ml，摇匀，放置15min后，在510nm处测吸光度-浓度值，所得吸光度-浓度曲线见图，回归方程如下:A=12.7210C-0.02903，相关系数r=0.9998。4.2、样品处理取采回的新鲜芦蒿叶，洗净，参考相关文献，在105℃烘至约八成干,剪成约1cm长度，用粉碎机粉碎，再
7、在105℃烘至恒重。采用Soxhlet提取法，以无水乙醚为脱脂剂,于43℃水浴中脱脂至充分除去样品中脂类和脂溶性色素。取出样品滤纸包，先置通风处晾干，再将滤纸包置烘箱中130℃烘干，放入干燥器中冷却备用。4.3、样品处理方法湿热法：将鲜叶置于高压反应釜加压蒸30min，另取鲜叶常压蒸30min。将阴干叶置于高压反应釜加压蒸15min，另取阴干叶常压蒸15min。氧化法：（1）H2O2法：将鲜叶、阴干叶分别用用2倍量H2O2浸泡10min（H2O2浓度1%、温度50℃）、10min（2%、40℃）、30min（0.5%、30℃）、30min（2%、50℃）、60m
