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1、参地糖脉宁对糖尿病大鼠免疫系统的影响【摘要】目的观察参地糖脉宁对糖尿病大鼠外周血T淋巴细胞及其细胞因子和免疫器官系数的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为糖尿病组(DM组)、糖尿病阿司匹林干预组(AD组)、糖尿病参地糖脉宁干预组(SD组)、对照组(NC组)。流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数,酶联免疫吸附双抗体夹法(ELISA)测定各组大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6),测定并计算免疫器官系数。结果DM组CD3+、CD4+、CD8+T细胞和胸腺指数显著低于NC组(P<0.01),而IL-6和TNF-α显著高于NC组(P<0.01)；
2、SD组和AD组的CD3+、CD4+、CD8+T细胞和胸腺指数显著高于DM组(P<0.05),TNF-α和IL-6显著低于DM组(P<0.01)；与AD组比较,SD组上述指标有明显改善(P<0.05)。结论参地糖脉宁对糖尿病大鼠免疫系统有保护作用。【关键词】糖尿病；阿司匹林；参地糖脉宁；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-6；大鼠Keywords：diabetes；aspirin；ShendiTangmaining；TNF-α；IL-6；rat1型糖尿病是在一定遗传因素的基础上,由于环境因子的刺激,有T淋巴细胞参与介导的胰岛β8细胞损害而导致的胰岛素分泌不足的慢性自身免疫性疾病[1
3、]。在糖尿病的发生及发展中,T细胞亚群及其细胞因子起重要作用,同时糖尿病亦影响T细胞亚群及其细胞因子功能。本研究用参地糖脉宁对糖尿病大鼠进行灌胃处理,并以阿司匹林灌胃作为干预对照,观察糖尿病大鼠免疫系统的变化及参地糖脉宁对实验性糖尿病大鼠免疫系统的保护机制。 1材料与方法 1.1动物、试剂及药物选用雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠48只,体重190～210g(苏州大学实验动物中心提供),血糖正常。链脲佐菌素(STZ)、柠檬酸三钠、柠檬酸为美国Sigma公司产品。红细胞裂解液、小鼠抗大鼠CD3+FITC、小鼠抗大鼠CD4+R-PE、小鼠抗大鼠CD8+R-PE为Caltag公司产
4、品。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)测定ELISA试剂盒、白细胞介素-6(IL-6)测定ELISA试剂盒为美国Biosource公司产品。参地糖脉宁溶液由苏州市立医院内分泌科提供。阿司匹林为南京白敬宇制药有限公司产品。 1.2造模、分组与给药正常SD大鼠适应性喂养7d,禁食不禁水128h后,腹腔内注射STZ60mg/kg。STZ腹腔注射72h后取血,血糖≥13.9mmoL/L连续3d者为糖尿病模型。糖尿病模型大鼠分为糖尿病组(DM组)、糖尿病阿司匹林干预组(AD组)、糖尿病参地糖脉宁干预组(SD组)。另有鼠龄和体重相似的雄性SD大鼠作为对照组(NC组),每组12只。NC组注射等量的枸橼酸缓冲
5、液。模型建立1周后,AD组予阿司匹林30mg/(kg·d)灌胃,SD组予参地糖脉宁溶液5g/(kg·d)灌胃,DM组与NC组予等量的蒸馏水灌胃,饲养12周结束实验。 1.3样本获取用药前及用药12周后用毛细玻璃管从内眦静脉取血2mL,用肝素抗凝,用于外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞测定；次日用毛细玻璃管从内眦静脉取血2mL,离心分离血清,置-70℃保存,用于TNF-α和IL-6的测定。灌胃12周后,大鼠称重,脱颈椎处死解剖,取出胸腺,滤纸吸干血迹后称重。 1.4指标测定 1.4.1外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞测定 测定管加入萤光标记的抗体50μL；再加入肝素抗凝全
6、血50μL,混匀；避光,室温,孵育15min；加入50μ8L溶血剂,溶血；PBS洗涤1次；0.5～1mLPBS重悬细胞,上机检测。 1.4.2肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的测定采用ELISA法。2h测定450nm吸光度。 1.4.3免疫器官系数的测定 免疫器官系数＝器官重量(mg)/体重(g)。 1.5统计学方法实验数据采用SPSS10.O软件进行分析,所有数值用x±s表示,组间比较采用t检验。 2结果 (见表1～表3)表1各组大鼠用药前后外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞计数和CD4+/CD8+比值比较(略)注：与NC组用药前比较(略),★P
7、<0.O5,★★P<0.O1；与NC组用药后比较,▲P<0.O5,▲▲P<0.O1；与DM组用药后比较,#P<0.O5,##P<0.O1(下同)表2各组大鼠用药前后血清TNF-α和IL-6水平比较(略)表3各组大鼠用药后免疫器官系数比较(略)8 3讨论 T淋巴细胞是机体最重要的免疫细胞群,根据细胞表面分子(CD)分为CD4+和CD8+两大亚群；按功能分为辅助性T细胞、细
