细胞生物学实验技术st

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1、实验一第一部分、显微镜的使用一、实验目的与要求1、了解光学显微镜的结构与工作原理；2、掌握光学显微镜的使用方法；3、掌握光学显微镜的日常维护技术。二、光学显微镜的基本构造及功能1．镜筒(tube)：为安装在光镜最上方或镜管前方的圆筒状结构(图1、2)．其上端可装载目镜，下端与物镜转换器相连。根据镜简的数目，光镜可分为单筒式和双筒式两类。单筒光镜又分为直立式和倾斜式两种，而双筒式光镜的镜筒均为倾斜的。镜筒直立式光镜与物镜的中心线〔光轴〕在同一直线上，而镜筒倾斜式光镜的目镜与物镜的中心线互成45。角，在其镜筒中装

2、有能使光线转换45。角的棱镜。2．物镜转换器(revolvingnose-piece)：又称旋转盘，是安装在镜简下方的一圆盘状构造，可以按顺时针或逆时针方向自由旋转，其上均匀分布有3—4个圆孔，用以装载不同放大倍数的物镜。转动旋转盘可使不同的物镜到达工作位置(即与光路合轴)，使用时注意凭手感使所需物镜准确到位。3．镜臂(arm)：为支持镜筒和镜台的弯曲状构造，是取用显微镜时握拿的部位。镜筒直立式光镜在镜管与其下方的镜柱之间有一倾斜关节，可使镜简向后倾斜一定角度以方便观察，但使用时倾斜角度不应超过45。角，否则

3、显微镜由于重心偏移容易翻倒。4．调焦器(focusingajustment)：也称调焦螺旋，为调节焦距的装置，位于镜臂的上端(镜筒直立式光镜)或下端(镜筒倾斜式光镜)，分粗调螺旋(大螺旋)和细调螺旋(小螺旋)两种。粗调螺旋可使镜筒或载物台以较快速度或较大幅度升降，能迅速调节好焦距使物像呈现在视野中，适于低倍镜观察时的调焦。而细调螺旋只能使镜简或载物台缓慢或较小幅度地升降(升或降的距离不易被肉眼观察到)，适用于高倍镜和油镜的聚焦或焦距的精细调节，也常用于观察标本的不同层次，一般在粗调螺旋调焦的基础上使用。有些类

4、型的光镜，粗调螺旋和细调螺旋重合在一起安装在镜柱的两侧。在右侧粗调螺旋的内侧有一窄环，称为粗调松紧调节轮，其功能是调节粗调螺旋的松紧度(向外转偏松．向内转偏紧)。另外，在左侧粗调螺旋的内侧有一粗调限位环凸柄，当用粗调螺旋调准焦距后向上推紧该柄，可使粗调螺旋限位，此时镜台不能继续上升但细调螺旋仍可调节；5．载物台(stage)；也称平台，是位于物镜转换器下方的方形平台，是放置被观察的玻片标本的地方。平台的中央有一圆孔称为通光孔，来自下方的光线经此孔照射到标本上。在载物台上通常装有标本移动器(也称移片器)，移片器

5、上安装的弹簧夹可用于固定玻片标本，转动移片器的两个螺旋可使玻片标本前后左右地移动，寻找目标较为方便。在移片器上一般还附有纵横游标尺，可以计算标本移动的距离和确定标本的位置。游标尺一般由主标尺(A)和副标尺(B)组成(图3)。副标尺的分度为主标尺的9／10。使用时先看副标尺的0点位置，再看主副标尺刻度线的重合点即可读出准确的数值，图2中所示的数值应为26．4mm。6．镜柱(post)：将镜臂与镜座相连的短臂。7．镜座(base)；位于最底部的构造，为整个显微镜的基座，用于支持和稳定镜体。有的显微镜在镜座内装有照

6、明光源等构造。22图2普通光学显微镜结构示意图图3游标尺的使用光学系统部分光镜的光学系统主要包括物镜、目镜和照明装置(反光镜、聚光器和光圈等)。1．目镜(ocula)：又称接目镜，安装在镜筒的上端，起着将物镜所放大的物像进一步放大的作用。每个目镜一般由两个透镜组成，在上下两透镜(即授目透镜和会聚透镜)之间安装有能决定视野大小的金属光阑——22视场光阑，此光阑的位置即是物镜所放大实像的位置，故可将一小段细金属丝或头发粘附在光阑上作为指针，用以指示视野中的某一部分供他人观察。另外，还可在光阑的面上安装目镜测微尺。

7、每台显微镜通常配置2—3个不同放大倍率的目镜，常见的有5×、10×和15×(×表示放大倍数)的目镜，可根据不同的需要选择使用，最常使用的是10×目镜。2．物镜(objective)：也称接物镜，安装在物镜转换器上。每台光镜一般有3—4个不同放大倍率的物镜，每个物镜由数片凸透镜和凹透镜组合而成，是显微镜最主要的光学部件，决定着光镜分辨力的高低。常用物镜的放大倍数有10×、40×和100×等几种。一般将8×或10×的物镜称为低倍镜(而将5×以下的叫做放大镜)；将40×或45×的称为高倍镜；将90×或100×的称为

8、油镜(这种镜头在使用时其顶端得浸在油中)。在每个物镜上通常都有能反映其主要性能的参数，主要有放大倍数和数值孔径(如10／0.25、40／0.65和l00／1.25)、该物镜所要求的镜简长度和标本上的盖玻片厚度(160／0.17，单位mm)等(图4)，另外，在油镜上还常标有“油”或“oil”等字样。油镜在使用时需要用香柏油或石蜡油作为介质，这是因为油镜的透镜和镜孔较小，而光线要通过载破片和空气才能进入